单向免疫琼脂扩散.ppt
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1、一,2%离子琼脂; PBS (pH7.2,0.01M) ; 标准已知阳性血清; 稀释的待测血清标本(浓度分别为1/30、51/40、1/50) ; 免疫琼扩阳性血清; 已知标准琼扩抗原,诊断抗原; 湿盒(容器内加湿纱布或泡沫塑料) ; 打孔器(孔径3mm) ; 打孔模板 ; 微量加样器;,血浆 的主要作用是运载血细胞,运输维持人体生命活动所需的物质和体内产生的废物等。血浆相当于结缔组织的细胞间质。是血液的重要组成分,呈淡黄色液体(因含有胆红素)。血浆的化学成分中,水分占9092,溶质以血浆蛋白为主。血浆蛋白是多种蛋白质的总称,用盐析法可将其分为白蛋白、球蛋白和纤维蛋白原三类。血浆蛋白质的功
2、能有:维持血浆胶体渗透压;组成血液缓冲体系,参与维持血液酸碱平衡;运输营养和代谢物质,血浆蛋白质为亲水胶体,许多难溶于水的物质与其结合变为易溶于水的物质;营养功能,血浆蛋白分解产生的氨基酸,可用于合成组织蛋白质或氧化分解供应能量;参与凝血和免疫作用。血浆的无机盐主要以离子状态存在,正负离子总量相等,保持电中性。这些离子在维持血浆晶体渗透压、酸碱平衡、以及神经-肌肉的正常兴奋性等方面起着重要作用。血浆的各种化学成分常在一定范围内不断地变动,其中以葡萄糖、蛋白质、脂肪和激素等的浓度最易受营养状况和机体活动情况的影响,而无机盐浓度的变动范围较小。血浆的理化特性相对恒定是内环境稳态的首要表现。,血清:
3、是指血液中既不含血细胞(血清不含红细胞和白细胞)也不含凝固因子的成分;也就是除去纤维蛋白原的血浆,血液凝固析出的淡黄色透明液体。如将血液自血管内抽出,放入试管中,不加抗凝剂,则凝血反应被激活,血液迅速凝固,形成胶冻。凝血块收缩,其周围所析出之淡黄色透明液体即为血清,也可于凝血后经离心取得。在凝血过程中,纤维蛋白原转变成纤维蛋白块,所以血清中无纤维蛋白原,这一点是与血浆最大的区别。而在凝血反应中,血小板释放出许多物质,各凝血因子也都发生了变化。这些成分都留在血清中并继续发生变化,如凝血酶原变成凝血酶,并随血清存放时间逐渐减少以至消失。这些也都是与血浆区别之处。但大量未参加凝血反应的物质则与血浆基
4、本相同。为避免抗凝剂的干扰,血液中许多化学成分的分析,都以血清为样品。 人体的血液由有形成分和无形成分组成,白血球、红血球、血小板是有形成分,血清是血液中的无形成分。用显微镜可以观察到血液中的白血球、红血球、血小板等有形成分,血清为去除纤维蛋白原后的无形成分,颜色微黄,透亮。 血清的基本成分是水,水中溶有蛋白质、脂肪、糖、无机盐、维生素等营养成分,也溶有人体代谢产物。血清中有抗体,这是被称作免疫球蛋白的蛋白质。,抗毒血清: 因制作时是将蛇毒、病原菌产的毒等小量多次地注射到免子、马血管内,每日慢慢加大注射量,一定时间后,因该动物体内产生抗体,经检测,达到一定效价后,就可以抽血。血液分离血清后再经
5、提纯,就成了抗毒血清。 如蛇、白喉、破伤风、狂犬病抗毒血清等都是如此制备,用来治疗相应毒素反应。 该生物制剂是异种血清,对人会有过敏反应,注射前均要做皮试。阴性可注射,阳性必需作脱敏疗法才行。,破伤风抗毒素 是一种免疫马血清,对人体是一种异性蛋白,具有抗原性(过敏反应),因此在用药前先作过敏试验。试验结果为阴性可直接注射破伤风抗毒素,试验结果为阳性者,则应进行脱敏注射,即小剂量分4---5次注射破伤风抗毒素。在用过破伤风抗毒素超过一周者,如再使用,还须重作皮肤试验。,抗血清或抗体仍能产生可观察到的标准免疫反应时的稀释度。如抗血清的效价为1:1000,即抗血清稀释1000倍时仍能产生可观察到的免疫反应。,效价,指抗体的物理状态及其在体内的滞留时间,以其与抗原反应的多少来表示其免疫效果,称为抗体效价。,抗体效价测定,抗体效价测定是根据大分子颗粒抗原于其相应的抗体相结合,在适量的电解质存在及一定的温度下,经过一定时间可出现肉眼可见的凝集团块,医学称为凝集反应,一般均以标准抗原测定免疫血清或患者血清中抗体的效价。,
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