常用pGEX载体图谱

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1、Rosetta系列的表达菌株可以提供T7 RNA聚合酶，它能表达PET系列载体上的外源基因。。。pGEX系列载体上的外源基因不需要T7 RNA聚合酶，普通的大肠杆菌经IPTG诱导即可表达 Tac启动子是一组由Lac和trp启动子人工构建的杂合启动子，受Lac阻遏蛋白的负调节，它的启动能力比Lac和trp都强。其中Tac 1是由Trp启动子的－35区加上一个合成的46 bp DNA片段(包括Pribnow 盒)和Lac操纵基因构成，Tac 12是由Trp的启动子-35区和Lac启动子的-10区，加上Lac操纵子中的操纵基因部分和SD序列融合而成 蛋白标签： A myc tag is a

2、 polypeptide protein tag derived from the c-myc gene product that can be added to a protein using recombinant DNA technology. It can be used for affinity chromatography, then used to separate recombinant, overexpressed protein from wild type protein expressed by the host organism. It can also be use

3、d in the isolation of protein complexes with multiple subunits. A myc tag can be used in many different assays that require recognition by an antibody. If there is no antibody against the studied protein, adding a myc-tag allows one to follow the protein with an antibody against the Myc epitope. Ex

4、amples are cellular localization studies by immunofluorescence or detection by Western blotting. The peptide sequence of the myc-tag is (in 1- and 3-letter codes, respectively): N-EQKLISEEDL-C, N-Glu-Gln-Lys-Leu-Ile-Ser-Glu-Glu-Asp-Leu-C, where N stands for Amino-terminus and C stands for Carboxy t

5、erminus. The tag is approximately 1202 Daltons in atomic mass and has 10 amino acids. It can be fused to the C-terminus and the N-terminus of a protein. It is advisable not to fuse the tag directly behind the signal peptide of a secretory protein, since it can interfere with translocation into the 

6、secretory pathway. A monoclonal antibody against the myc epitope, named 9E10, is available from the non-commercial Developmental Studies Hybridoma Bank pGEX4T1载体基本信息 出品公司: GE 别名: pGEX-4T-1, pGEX4T1, pGEX 4T 1 质粒类型: 大肠杆菌蛋白表达载体 表达水平: 高拷贝 启动子: Tac 克隆方法: 多克隆位点，限

7、制性内切酶 载体大小: 4969 bp 5' 测序引物及序列: pGEX5':  GGGCTGGCAAGCCACGTTTGGTG 3' 测序引物及序列: pGEX3': CCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGG 载体标签: N-GST 载体抗性: Ampicillin 氨苄 备注: 复制子是pMB1 产品目录号: 27-4580-01 稳定性: 瞬时表达 Transient 组成型: 诱导表达 病毒/非病毒: 非病毒 pGEX4T1载体质粒图谱和多克隆位点信息 原核生物DNA复制起始点，是DNA链上独特的具有起始DNA复制功能的碱基序列。大

8、肠杆菌的复制起点包括OriC和OriH Thrombin 凝血酶 pGEX4T1载体简介 pGEX4T1载体序列 LOCUS pGEX-4T-1 4969 bp DNA circular SYN DEFINITION pGEX-4T-1 ACCESSION KEYWORDS SOURCE ORGANISM other sequences; artificial sequences; vectors. COMMENT     This file is created by Vector NTI COMMENT

9、     VNTAUTHORNAME|| FEATURES Location/Qualifiers source 1..4969 /organism="pGEX-4T-1" /mol_type="other DNA" promoter 184..212 /label="tac_promoter" misc_feature 224..246

10、 /label="M13_pUC_rev_primer" gene 258..977 /label="GST (variant)" /gene="GST (variant)" CDS 258..977 /label="ORF frame 3" misc_feature complement(1019..1041) /l

11、abel="pGEX_3_primer" promoter 1307..1335 /label="AmpR_promoter" gene 1377..2237 /label="Ampicillin" /gene="Ampicillin" CDS 1377..2237 /label="ORF frame 3" rep

12、_origin 2392..3011 /label="pBR322_origin" misc_feature 3309..4400 /label="lacI" CDS 3441..4400 /label="ORF frame 3" promoter 4449..4478 /label="lac_promoter" mis

13、c_feature 4492..4514 /label="M13_pUC_rev_primer" promoter 4513..4531 /label="M13_reverse_primer" CDS 4523..81 /label="ORF frame 2" misc_feature 4540..4695 /label="lacZ_a

14、" promoter complement(4543..4559) /label="M13_forward20_primer" misc_feature complement(4552..4574) /label="M13_pUC_fwd_primer" pGEX4T2载体基本信息 出品公司: GE 别名: pGEX-4T-2, pGEX4T2, pGEX 4T 2 质粒类型: 大肠杆菌蛋白表达载体 表达水平: 高拷贝 启动子: Tac 克

15、隆方法: 多克隆位点，限制性内切酶 载体大小: 4970 bp 5' 测序引物及序列: pGEX5':  GGGCTGGCAAGCCACGTTTGGTG 3' 测序引物及序列: pGEX3': CCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGG 载体标签: N-GST 载体抗性: Ampicillin 氨苄 备注: 复制子是pMB1 产品目录号: 27-4581-01 稳定性: 瞬时表达 Transient 组成型: 诱导表达 病毒/非病毒: 非病毒 pGEX4T2载体质粒图谱和多克隆位点信息 pGEX4T2载体简介 pGEX4T2载体序列 L

16、OCUS pGEX-4T-2 4970 bp DNA circular SYN DEFINITION pGEX-4T-2 ACCESSION KEYWORDS SOURCE ORGANISM other sequences; artificial sequences; vectors. COMMENT     This file is created by Vector NTI COMMENT     VNTAUTHORNAME|| FEATURES Location/Qualifiers

17、 source 1..4970 /organism="pGEX-4T-2" /mol_type="other DNA" promoter 184..212 /label="tac_promoter" misc_feature 224..246 /label="M13_pUC_rev_primer" gene 258..9

18、78 /label="GST (variant)" /gene="GST (variant)" CDS 258..974 /label="ORF frame 3" misc_feature complement(1020..1042) /label="pGEX_3_primer" promoter 1308..1336

19、 /label="AmpR_promoter" gene 1378..2238 /label="Ampicillin" /gene="Ampicillin" CDS 1378..2238 /label="ORF frame 1" rep_origin 2393..3012 /label="pBR322_orig

20、in" misc_feature 3310..4401 /label="lacI" CDS 3442..4401 /label="ORF frame 1" promoter 4450..4479 /label="lac_promoter" misc_feature 4493..4515 /label="M13_pUC_rev

21、_primer" promoter 4514..4532 /label="M13_reverse_primer" CDS 4524..81 /label="ORF frame 3" misc_feature 4541..4696 /label="lacZ_a" promoter complement(4544..4560)

22、 /label="M13_forward20_primer" misc_feature complement(4553..4575) /label="M13_pUC_fwd_primer" pGEX4T3载体质粒图谱和多克隆位点信息 pGEX4T3载体简介 pGEX4T3载体序列 LOCUS pGEX-4T-3 4968 bp DNA circular SYN DEFINITION pGEX-4T-3 ACCESSION KEYWORDS SOURCE

23、 ORGANISM other sequences; artificial sequences; vectors. COMMENT This file is created by Vector NTI COMMENT VNTAUTHORNAME|| FEATURES Location/Qualifiers source 1..4968 /organism="pGEX-4T-3" /mol_type="other DNA"

24、 promoter 184..212 /label="tac_promoter" misc_feature 224..246 /label="M13_pUC_rev_primer" gene 258..976 /label="GST (variant)" /gene="GST (variant)" CDS 258.

25、.980 /label="ORF frame 3" misc_feature complement(1018..1040) /label="pGEX_3_primer" promoter 1306..1334 /label="AmpR_promoter" gene 1376..2236 /label="Ampicillin"

26、 /gene="Ampicillin" CDS 1376..2236 /label="ORF frame 2" rep_origin 2391..3010 /label="pBR322_origin" misc_feature 3308..4399 /label="lacI" CDS 3440..4399

27、 /label="ORF frame 2" promoter 4448..4477 /label="lac_promoter" misc_feature 4491..4513 /label="M13_pUC_rev_primer" promoter 4512..4530 /label="M13_reverse_primer" CDS 4522

28、..81 /label="ORF frame 1" misc_feature 4539..4694 /label="lacZ_a" promoter complement(4542..4558) /label="M13_forward20_primer" misc_feature complement(4551..4573) /label="M13_pUC_f

29、wd_primer" pGEX6P1载体基本信息 出品公司: GE 别名: pGEX-6P-1, pGEX6P1, pGEX 6P 1 质粒类型: 大肠杆菌蛋白表达载体 表达水平: 高拷贝 启动子: Tac 克隆方法: 多克隆位点，限制性内切酶 载体大小: 4984 bp 5' 测序引物及序列: pGEX5':  GGGCTGGCAAGCCACGTTTGGTG 3' 测序引物及序列: pGEX3': CCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGG 载体标签: N-GST 载体抗性: Ampicilli

30、n 氨苄 备注: 复制子是pMB1 产品目录号: 27-4597-01 稳定性: 瞬时表达 Transient 组成型: 诱导表达 病毒/非病毒: 非病毒 pGEX6P1载体质粒图谱和多克隆位点信息 pGEX6P1载体简介 pGEX6P1载体序列 LOCUS pGEX-6P-1 4984 bp DNA circular SYN DEFINITION pGEX-6P-1 ACCESSION KEYWORDS SOURCE ORGANISM other sequences; artificial se

31、quences; vectors. COMMENT     This file is created by Vector NTI COMMENT     VNTAUTHORNAME|| FEATURES Location/Qualifiers source 1..4984 /organism="pGEX-6P-1" /mol_type="other DNA" promoter 184..212

32、 /label="tac_promoter" misc_feature 224..246 /label="M13_pUC_rev_primer" gene 258..992 /label="GST" /gene="GST" CDS 258..992 /label="ORF frame 3" misc_fe

33、ature 918..938 /label="precision" misc_feature complement(1034..1056) /label="pGEX_3_primer" promoter 1322..1350 /label="AmpR_promoter" gene 1392..2252 /label="Ampicillin

34、" /gene="Ampicillin" CDS 1392..2252 /label="ORF frame 3" rep_origin 2407..3026 /label="pBR322_origin" misc_feature 3324..4415 /label="lacI" CDS 3456..4415

35、 /label="ORF frame 3" promoter 4464..4493 /label="lac_promoter" misc_feature 4507..4529 /label="M13_pUC_rev_primer" promoter 4528..4546 /label="M13_reverse_primer" CDS

36、 4538..81 /label="ORF frame 2" misc_feature 4555..4710 /label="lacZ_a" promoter complement(4558..4574) /label="M13_forward20_primer" misc_feature complement(4567..4589) /label

37、="M13_pUC_fwd_primer" pET28a载体基本信息 出品公司: EMD Biosciences (Novagen) 别名: pET28a, pet 28a, pET-28a(+) 质粒类型: 大肠杆菌蛋白表达 表达水平: 高 克隆方法: 多克隆位点，限制性内切酶 载体大小: 5369 bp 5' 测序引物及序列: T7: 5'-TAATACGACTCACTATAGGG-3' 3' 测序引物序列:   T7t: 5'-GCTAGTTATTGCTCAGCGG-3' 载体标签: N-His, N-Thrombin, N-T7, C-Hi

38、s 载体抗性: 卡那 备注: N端含有Thrombin蛋白酶切位点; pET28a, b, c的差异仅仅存在于多克隆位点处。 产品目录号: 69864-3 稳定性: 瞬时表达 Transient 组成型: 组成型 Constitutive 病毒/非病毒: 非病毒 pET28a载体质粒图谱和多克隆位点信息 pET28a载体简介 pET-28a-c(+)载体带有一个N端的His/Thrombin/T7蛋白标签，同时含有一个可以选择的C端His标签。pET28a载体的单一的多克隆位点见上面的环状质粒图谱。注意：载体序列是以pBR322质粒的编

39、码规矩进行编码的，所以T7蛋白表达区在质粒图谱上面是反向的。 T7 RNA聚合酶启动的克隆和表达区域在质粒图谱中也被标注了出来。质粒的F1复制子是被定向的，所以在T7噬菌体聚合酶的作用下，包含有蛋白编码序列的病毒粒子能够产生，并启动蛋白表达，同时蛋白表达将被T7终止子序列(Cat. No. 69337-3)的作用下终止蛋白翻译。 pET30a载体基本信息 出品公司: EMD Biosciences (Novagen) 别名: pET30a, pet 30a 质粒类型: 大肠杆菌蛋白表达 表达水平: 高 克隆方法: 多克隆位点，

40、限制性内切酶 载体大小: 5422 bp 5' 测序引物及序列: T7: 5'-TAATACGACTCACTATAGGG-3' 3' 测序引物序列:   T7t: 5'-GCTAGTTATTGCTCAGCGG-3' 载体标签: N-His, N-S, N-Thrombin, N-EK, C-His 载体抗性: 卡那 备注: pET30a, b, c的差异只存在于多克隆位点，其他位点不存在。 产品目录号: 69909-3 稳定性: 瞬时表达 组成型: 组成型 病毒/非病毒: 非病毒 pET30a载体质粒图谱和多克隆位点信息

41、 pET30a载体简介 pET-30a(+)载体携带有一个N端的His标签/Thrombin酶切位点/ S标签/ EK蛋白酶切标签以及一个可选择的C端His标签。 载体的多克隆位点见上面的图谱。需要注意的是图谱中的核苷酸编码顺序是以pBR322载体的复制方向为正方向，所以T7表达区域在图谱中是处于反向的位 置。T7 RNA聚合酶启动的克隆和表达区域在质粒图谱中也被标注了出来。质粒的F1复制子是被定向的，所以在T7噬菌体聚合酶的作用下，包含有蛋白编码序列的病毒 粒子能够产生，并启动蛋白表达，同时蛋白表达将被T7终止子序列(Cat. No. 69337-3)的作用下终止蛋白翻译。

42、 pet32a载体基本信息 出品公司: EMD Biosciences(Novagen) 别名: pET32a, pet 32a 质粒类型: 大肠杆菌蛋白表达 表达水平: 高 克隆方法: 多克隆位点，限制性内切酶 载体大小: 5900bp 5' 测序引物: T7： 5'-TAATACGACTCACTATAGGG-3' 3' 测序引物:   T7t: 5'-GCTAGTTATTGCTCAGCGG-3' 载体标签: thioredoxin (N端); His (中间和C端) 载体抗性: 氨苄 备注: pE

43、T32a载体用于表达可溶性，具有活性功能的蛋白;pET-32a(+)载体具有N端Thrombin（凝血酶）酶切位点，N端肠激酶酶切位点。pET32啊，pET32b，pET32c载体的差异主要是在于多克隆位点，其他地方完全一致。   产品货号: 69015-3 稳定性: 瞬时表达 组成型: 组成型 病毒/非病毒: 非病毒 pet32a载体质粒图谱和多克隆位点信息 pet32a载体简介 pET32系列载体是设计用来克隆构建和高水平融合表达表达带有109个氨基酸Trx标签的蛋白质序列。将基因插入到载体的多克隆位点，能够获得融合表达蛋白质。同时融合蛋白包含有Hi

44、s标签和S标签，这些可以用于蛋白表达检测和纯化过程。 载体的多克隆位点见上面的图谱。需要注意的是图谱中的核苷酸编码顺序是以pBR322载体的复制方向为正方向，所以T7表达区域在图谱中是处于反向的位置。T7 RNA聚合酶启动的克隆和表达区域在质粒图谱中也被标注了出来。质粒的F1复制子是被定向的，所以在T7噬菌体聚合酶的作用下，包含有蛋白编码序列的病毒 粒子能够产生，并启动蛋白表达，同时蛋白表达将被T7终止子序列(Cat. No. 69337-3)的作用下终止蛋白翻译。 pET23a载体基本信息 出品公司: EMD Biosciences(Novagen) 别名: pET23a

45、, pet 23a 质粒类型: 大肠杆菌蛋白表达 表达水平: 高 克隆方法: 多克隆位点，限制性内切酶 载体大小: 3666bp 5' 测序引物: T7 5' 测序引物序列:   5'-TAATACGACTCACTATAGGG-3' 载体标签: N-T7, C-His 载体抗性: Ampicillin 克隆菌株: DH5a 表达菌株: BL21系列 备注: Same as pET21abcd(+) but no lac; a,b,c,d vary by MCS. 产品目录号:  69745-3 稳定性: 稳表达 组成型: 组成型 病毒/

46、非病毒: 非病毒 pET23a载体质粒图谱和多克隆位点信息 pET23a载体简介 The pET-23a-d(+) vectors carry an N-terminal T7•Tag® sequence plus an optional C-terminal His•Tag® sequence. These vectors differ from pET-21a-d(+) by the “plain” T7 promoter instead of the T7lac promoter and by the absence of the lacI gen

47、e. Unique sites are shown on the circle map. Note that the sequence is numbered by the pBR322 convention, so the T7 expression region is reversed on the circular map. The cloning/expression region of the coding strand transcribed by T7 RNA polymerase is shown below. The f1 origin is oriented so that

48、 infection with helper phage will produce virions containing single-stranded DNA that corresponds to the coding strand. Therefore, single-stranded sequencing should be performed using the T7 terminator primer (Cat. No. 69337-3). pGEXKG载体基本信息 出品公司: ATCC 别名: pGEX-KG, pGEXKG, pGEX KG 质粒类型: 大肠杆

49、菌蛋白表达载体 表达水平: 高拷贝 启动子: Tac 克隆方法: 多克隆位点，限制性内切酶, BamHI，SmaI, EcoRI, XbaI, NcoI, SalI, XhoI, SacI, HindIII 载体大小: 5006 bp 5' 测序引物及序列: pGEX5':  GGGCTGGCAAGCCACGTTTGGTG 3' 测序引物及序列: pGEX3': CCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGG 载体标签: N-GST 载体抗性: Ampicillin 氨苄 备注: 复制子是pMB1, 来源于pGEX-2T 产品目录号: 77103 稳定性: 瞬时表达 Transient 组成型: 诱导表达 病毒/非病毒: 非病毒 pGEXKG载体质粒图谱和多克隆位点信息 pMAL-C2X 表达载体使用直链淀粉树脂（amylose resin）分离融合蛋白