hela细胞的培养传代

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1、hela细胞的培养条件为: 2. 高糖DMEM培养基,100ml/l胎牛血清;培养液中一般血清含量为10%传代步骤:1．倒去细胞培养液（对于小口的培养瓶可采用顷倒方法,对于培养皿,必须用吸管吸出）吸取适量的PBS加入培养瓶中，轻轻振荡后弃去重复一次，以清于血清成分，利于胰酶消化加入适量0.25%胰蛋白酶（一般100mm培养皿可加入1ml,15cm培养瓶加入5-8滴）转动培养瓶，使其湿润整个细胞房，高温下消化2-3分钟。 翻转培养瓶,肉眼观察细胞单层,见细胞单层薄膜出现针孔大小空隙时即可顷去消化液,如消化程度不够可延长消化时间，或置于37°C孵箱中加速胰酶作用如见大量细胞片装脱落,已消化过头

2、,则不能顷倒消化液而直接进行下一步操作加入适量培养液终止消化吸取瓶中培养液反复冲瓶壁上的细胞层，至全部冲下轻轻吹打，混匀，成细胞悬液取样计数，调整细胞浓度为5’10/ml15cm培养瓶培养时，吸取1ml细胞悬液加到新培养瓶中，加入4ml培养液，盖好，置37°C孵箱中培养。 传代的天数要以HELA细胞的生长密度为基础，细胞密度大了就要传,应该每天观察HELA细胞，注意其生长状态.HELA细胞的生长分5期： 游离期细胞经消化分散后，由于愿生质收缩及细胞弹性，细胞成圆形，折光性强，呈悬浮状态。吸附期接种24小时后，由于细胞的附壁特性，开始贴壁，圆形细胞变成延展状态。 繁殖期细胞快速生长、分裂，形成细胞岛直至细胞单层。 维持期细胞形成单层后生长与分裂减缓、折光性减弱，细胞内颗粒增多，由于代谢物的积累,CO2增多，培养液变黄。 衰退期如不及时换液和传代，由于营养缺乏、代谢物积累，细胞内颗粒进一步增多，立体感差，细胞皱缩、脱落、逐渐衰老死亡。 应该在其维持期和衰退期及时换液.一般而言是4天换一次液.