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1、DNS法测还原糖方法
一原理
DNS即二硝基水杨酸法是利用碱性条件下，二硝基水杨酸(DNS)与还原糖发生氧化还原 反应，生成3-氨基-5-硝基水杨酸，该产物在煮沸条件下显棕红色，540nm处有吸收，且在 一定浓度范围内颜色深浅与还原糖含量成比例关系的原理，用比色法测定还原糖含量的。
-还原糖
HOOC
OH
(DM3)
NO 2
虱基-5 T霍£；櫛醸】?
桔紅色
二试剂及方法
2.1试剂
1. 1 mg/ml的葡萄糖溶液
2. 3,5-二硝基水杨酸
用400mL蒸馏水溶解6.3g3, 5—二硝基水杨酸，逐步加入21g氢氧化钠，再加入 182g四水合酒石酸钾钠、
2、5.0g苯酚、5.0g无水亚硫酸钠，温水浴(不超过48°C),不断搅 拌，直至溶液清澈透明。用蒸馏水定容至1000mL,保存在棕色瓶中，与二氧化碳隔绝， 静置5〜7天后使用，贮存期为6个月。
2.2葡萄糖标曲的绘制
表1葡萄糖标曲的绘制方法
试剂
0
1
2
3
4
5
葡萄糖标准液(ml)
0
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
蒸馏水(ml)
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
3,5-二硝基水杨酸(ml)
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
糖含量(mg)
0
0.1
0.2
0.3
0.4
3、
0.5
混合均匀，沸水浴5min,冷却后加入4mL蒸馏水，混匀，在540nm下测OD值
2.3发酵液样品测定
将发酵液稀释一定倍数后，取3只比色管标号1,2,3,加入稀释和的发酵液0.5 ml，加入DNS 试剂0.5 ml混匀，沸水浴5min,冷却后加入4 ml蒸馏水混匀，测OD540
表2样品的测定方法
管号
0
1
2
还原糖待测样品（mL）
0.0
0.5
0.5
蒸馏水（mL）
0.5
0.0
0.0
DNS 试齐U （ mL）
0.5
0.5
0.5
蒸馏水（mL）
4
4
4
A540 nm
计算所得还原糖含量（mg）
三结果计算
3.1标曲
3.2样品的还原糖含量
还原糖含量（g/L ）=
x稀释倍数
计算得到的还原糖量（mg）
加人样品的体积（0.5ml）
DNS法测定还原糖
