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1、 医学细胞生物学设计医学细胞生物学设计 性实验报告性实验报告 实验项目一：动物细胞融合实验项目一：动物细胞融合实验原理实验原理 两个或两个以上的细胞在自发或诱导条件下合并成为一个双核或多核细两个或两个以上的细胞在自发或诱导条件下合并成为一个双核或多核细胞的过程成为胞的过程成为 。在通常情况下，两个细胞接触并不会发生融合现。在通常情况下，两个细胞接触并不会发生融合现象。因为各自存在完整的细胞膜，在特殊融合诱导物的作用下，两个细胞膜象。因为各自存在完整的细胞膜，在特殊融合诱导物的作用下，两个细胞膜发生一定变化，就可以促进两个或多个细胞聚集，相接触的细胞膜之间融合，发生一定变化，就可以促进两个或多个
2、细胞聚集，相接触的细胞膜之间融合，继而细胞质融合，形成一个大的融合细胞，在自然界的继而细胞质融合，形成一个大的融合细胞，在自然界的 就是细胞融合就是细胞融合的过程。的过程。目前，细胞融合的诱导物种类很多，常用的主要有灭活的仙台病毒，目前，细胞融合的诱导物种类很多，常用的主要有灭活的仙台病毒，聚乙二醇（聚乙二醇（PEGPEG）和电脉冲。目前应用最广泛的是聚乙二醇，因为它易得，）和电脉冲。目前应用最广泛的是聚乙二醇，因为它易得，简单，且融合效果稳定。简单，且融合效果稳定。实验用品实验用品 （1).1).材料：鸡血材料：鸡血 。（2).2).试剂：试剂：HanksHanks液液,PEGPEG溶液溶液
3、(MV=400)(MV=400)，16401640液（含液（含10%10%灭活灭活小牛血清和不含血清的两种），小牛血清和不含血清的两种），0.85%0.85%生理盐水，生理盐水，0.2%0.2%次甲基蓝染次甲基蓝染 (3).(3).仪器设备：显微镜仪器设备：显微镜(800r/min)(800r/min)，离心机，水浴箱，酒精，离心机，水浴箱，酒精灯，吸管，载玻片、盖玻片，滤纸。灯，吸管，载玻片、盖玻片，滤纸。混合液离心混合液离心(800800r/minr/min离心离心)8ml hanks8ml hanks液混匀液混匀实验步骤实验步骤8min静置静置1min1min后后 3737水浴水浴PEG
4、溶液溶液热的热的1640液混匀液混匀 37水浴水浴保温保温悬浮悬浮 离心离心洗涤洗涤 流尽剩余液流尽剩余液体体鸡血鸡血10%悬悬液液融化 冷却至5090S内加入加入Hanks液液含小牛含小牛血清的血清的1640液液0.2%0.2%次甲基次甲基蓝染染液染蓝染染液染色色镜检镜检37水浴水浴 5min离心弃上清离心弃上清10min吸纸吸干吸纸吸干37水浴水浴孵育孵育30min 注意事项注意事项 50%PEG50%PEG一定要保温在一定要保温在3737水浴中，不然冷却后会有结晶析出。水浴中，不然冷却后会有结晶析出。PEGPEG之前，一定要将离心管倒置在滤纸上，流尽液体，否则残留液之前，一定要将离心管倒
5、置在滤纸上，流尽液体，否则残留液会改变会改变PEGPEG的浓度。的浓度。3.3.融合过程观察：分别于温育融合过程观察：分别于温育5min5min、10min10min、20min20min、30min30min取细胞悬液一滴制成临时装片。取细胞悬液一滴制成临时装片。两个细胞核发生两个细胞核发生 ，形成一个含有两个或多个核的圆形细胞。，形成一个含有两个或多个核的圆形细胞。细胞融合过程细胞融合过程实验项目二：细胞核的分离与鉴定 细胞核。细胞内各种结构的比重和大小都不相同，在同一离心场内的沉降速度也不同，用不同的转速和不同的介质离心，就可以将细胞内各组分分级分离出来。细胞核的分离就是利用了细胞核的比
6、重大小与细胞内其他组分不同，先将组织制成匀浆，再在悬浮的均匀介质中进行离心，分离，甲苯胺蓝又可以将细胞核染成蓝紫色，这样，就可以鉴别分离出来的细胞核。实验用品实验用品：材料：小白鼠 试剂：生理盐水蔗糖，氯化钙溶液，1%甲苯胺蓝染液 仪器设备：显微镜，普通离心机，天平，离心管，滴管，玻璃漏斗，量筒，25ml烧杯，解剖剪，镊子，冲洗瓶，纱布，伯乐均浆器，载玻片，盖玻片，染色盘架实验步骤：断头处死小白鼠迅速开腹取肝加8ml预冷的蔗糖绿化高永液于烧杯中，将剪碎的肝组织倒入玻璃匀浆器，是匀浆器下端侵入盛有冰块的器皿。尽量剪碎肝组织，取1克放入烧杯中左手握持匀浆器右手将匀浆捣杆垂直插入管中匀浆，直至看不到明显的组织块过滤匀浆液于离心管中离心取上清液制一张涂片1将原离心管中剩余上清液吹打成沉淀成悬液另制涂片2滴染甲苯胺蓝染液滴染甲苯胺蓝染液镜检注意事项：1.操作规范，防止试剂污染。2.细胞悬液的涂片制作要轻柔。3.使用离心机要注意平衡，转速从低到高。预期结果：低倍镜下找到标本，再换高倍镜，可见肝细胞核已游离出来，被染成蓝紫色，圆形，中央有2到4个甚至更多个深蓝色的核仁。设计组名单姓名 学号王正旭 1120150135罗秀 1120150136徐鹭 1120150137汪俊成 1120150138张磊 1120150139吴霞 1120150140
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