挥发性盐基氮(TVB
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1、肉新鲜度的实验室检验:肉新鲜度的实验室检验方法较多,如挥发性盐基氨的测定、纳斯靳(Nessler) 氏试剂氨反应、球蛋白沉淀反应、pH值的测定、硫化氢的测定、细菌学检查等。但只有挥发性盐基氨的测 定作为国家现行法定检测方法,其他的实验室检测方法只能作为肉品新鲜度的辅助检验方法,应根据情况 选用。 (一)挥发性盐基氮(TVB-N)的测定 1. 半微量定氮法 (1)原理:蛋白质在酶和细菌的作用下分解后产生碱性含氮物质,有氨、伯胺、仲胺等,此类物质 具有挥发性,可在碱性溶液中被蒸馏出来,用标准酸滴定,计算含量。 ( 2)试剂 ① 氧化镁混悬液 ②2%硼酸溶液(吸收液)③0.2%甲基红乙醇液
2、 ④0.1%亚甲蓝水溶液 临用时将③④等量混合为混合指示液 ⑤0.0100N盐酸标准溶液或0.0100N硫酸标准溶液 ( 3 )仪器 ① 半微量定氮装置:Markhan氏式 ②微量滴定管:最小分度0.01ml ( 4)操作方法 ① 样液的制备:将样品除去脂肪、骨头及筋腱后,切碎搅匀,称取10g于锥形瓶中,加100ml水,不 时振摇,浸渍30min后过滤,滤液置于冰箱中备用。 ② 测定:预先将盛有10ml吸收液并加有5-6滴混合指示液的锥形瓶置于冷凝管下端,并使其下端插 入锥形瓶内吸收的液面下,精密吸取5ml上述样品滤液于蒸馏器反应室内,加5ml 1%氧化镁混悬液,迅速 盖塞,并加水
3、以防漏气,通入蒸汽,待蒸汽充满蒸馏器内时即关闭蒸汽出口管,由冷并行管出现第一滴冷 凝水开始计时,蒸馏5min即停止,吸收液用0.0100N盐酸标准溶液或0.0100N硫酸标准溶液滴定,终点 呈蓝紫色。同时做试剂空白试验。 ( 5)计算 (V-V ) XN X14 1 2 1 X = X 100 1 m X 5/100 1 式中:\——样品中挥发性盐基氮的含量,mg/100g V]——测定用样液消耗盐酸或硫酸标准溶液体积,ml V——试剂空白消耗盐酸或硫酸标准溶液体积,ml n1——盐酸或硫酸标准溶液的摩尔浓度,mol/L m1 样品质量,g 14——1N 盐酸或硫
4、酸标准溶液 1ml 相当氮的毫克数 2. 微量扩散法 (1)原理:挥发性含氮物质在碱性溶液中释出,在扩散皿中于37°C时挥发后吸收于吸收液中,用标 准酸滴定,计算含量。 ( 2)试剂 ① 饱和碳酸钾溶液:称取50g碳酸钾,加50ml水,微加热助溶,使用时取上清液。 ② 水溶性胶:称取10g阿拉伯胶,加10ml水,再加5ml甘油及5g无水碳酸钾(或无水碳酸钠),研 匀。 ③ 吸收液:混合指示液、0.0100N盐酸或硫酸标准溶液,与半微量定氮法相同。 ( 3 )仪器 ① 扩散皿(标准型):玻璃质,内外室总直径61mm,内室直径35mm;外室深度10mm,内室深度5mm; 外室壁存3
5、mm,内室壁存2.5mm,回壁纱厚玻璃盖,如图1-1所示,其他型号亦可用。 ② 微量滴定管:最小分度0.01ml。 ( 4)操作方法 ①将水溶性胶涂于扩散皿的边缘,在皿中央内室加入1ml吸收液及1滴混合指示液。在皿外室一侧加入1.00ml按半微量定氮法制备的样液,另一侧加入lml饱和碳酸钾溶液,注意勿使两滴接触,立即盖好; 密封后将皿于桌面上轻轻转动,使样液与碱液混合。 ②将扩散皿置于37°C温箱内放置2h,揭去盖,用0.01N盐酸标准溶液或硫酸标准溶液滴定,终点呈 蓝紫色。同时做试剂空白试验。 图 1-1 微量扩散皿(标准型) (5)说明 ① 加碳酸钾时应小心加入,不可溅入内室。 ② 扩散皿应洁净、干燥,不带酸碱性。 ③ 检样测定与空白试验均需各作2份平行试验。 ④ 计算 (V—V ) XN X14 3 4 1 X = X 100 2 m X 100/5 1 式中:X2——样品中挥发性盐基氮的含量,mg/100g V3——测定用样液消耗盐酸或硫酸标准溶液体积,ml V——试剂空白消耗盐酸或硫酸标准溶液体积,ml 4 N1——盐酸或硫酸标准溶液的摩尔浓度,mol/L mi 样品质量,g 14——1N 盐酸或硫酸标准溶液 1ml 相当氮的毫克数
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