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1、 2007年 年 终 工 作 总 结 高 双 全 07年 总 结 07年 掌 握 的 新 技 术 ； 07年 参 与 的 各 项 工 作 ； 07年 的 心 得 ； 08年 展 望 。 07年 掌 握 的 新 技 术 进 一 步 掌 握 了 ELSA技 术 (HRP)： 主 要 是 双 抗 夹 心 法 和 间接 法 ： 1-双 抗 夹 心 p24抗 原 ； 2- 间 接 法 p24、 gp41及 gp120抗 体 。 基 本 掌 握 western Blot的 技 术 （ AP） SDS-PAGE电 泳 转 膜 （ PVDF或 硝 酸 纤 维 素 膜 ） 封 闭 一 抗 洗 涤 酶 标 二 抗
2、 反 应 洗 涤 显 色 或 化 学 发 光 显 影 进 一 步 熟 练 掌握 PCR技 术 ： P2内 的 操 作 ： 1- 基 本 熟 悉 P2内 的 实 验 规 范 ； 2- 在 P2内 熟 练 进 行 操 作 。 RNAi相 关 实 验 ： HIV相 关 RNAi共 转 染 抑 制 效 果 鉴 定 。 NL 4-3 + Vif 37 293FT， 检 测 培 养 上 清 p24水 平 。 H9、 Hela细 胞 电 转 ： 掌 握 了 H9细 胞 电 转 技 术 ， 并 对 Hela细 胞 进 行 电 转条 件 优 化 。 基 本 掌 握 了 流 式 细 胞 检 测 技 术 ： 1-
3、FL1绿 色 荧 光 相 关 的 检 测 ； 2- 划 门 选 择 细 胞 群 及 选 定 阳 性 区 域 。 初 步 掌 握 了 HIV中 和 实 验 ： 1- 基 本 掌 握 HIV病 毒 滴 度 测 定 步 骤 ； （ TZM-B1） 2- 基 本 掌 握 HIV中 和 实 验 步 骤 。 （ TZM-B1） 致 敏 脾细 胞 骨 髓 瘤细 胞离 心 1500rpm 10min 50%PEG2000 1ml 培 养 液 10ml离 心 1500rpm 10min均 匀 混 合 1min 加 入 HAT培 养液 悬 浮 细 胞 ，置 于 培 养 孔 内细 胞 融 合 实 验 SP20 DN
4、A合 成脾 脏 细 胞 利 用 LG+U （ A）利 用 H和 T绕 过 A注 ： 脾 脏 细 胞 在 正 常 培 养 基 中 无 法 长 期 生 存 ， 2周 内 就 会 死 亡 SP20无 法 利 用 H和 T绕 过 A， 直 接 死 亡 。随机融合后的细胞筛选SP20+脾 脏 细 胞 07年 参 与 的 工 作 实 验 室 慢 病 毒 相 关 的 质 粒 大 提 及 病 毒 生 产 。 1- 除 了 Rev（ 070416） 质 量 较 差 ， 其 他 大 提 质 粒 质量 都 比 较 稳 定 ， 质 粒 浓 度 基 本 都 在 10ug/uL以 上 。 2- 病 毒 生 产 比 较 稳
5、 定 。 HIV感 染 性 克 隆 的 大 提 及 生 产 ： HIV感 染 性 克 隆 大 提 （ 4-3： 10.8 ug/uL， 89.6： 8.6 ug/uL， 94： 14 ug/uL， 249： 2.9 ug/uL ， MJ4：6.8 ug/uL ） ， 生 产 做 的 还 比 较 少 。 参 与 了 慢 病 毒 各 质 粒 的 构 建 工 作 ： 包 括 Luc、 Lumio、 H2Kk及 HIV gp160等 系 列 质粒 的 构 建 。 细 胞 研 究 方 面 的 一 些 实 验 ： 如 电 转 ， 流 式 检 测 H2Kk表 面 标 记 ， HIV RNAi实验 等 。 H
6、IV中 和 单 抗 实 验 ： 学 习 并 参 与 了 部 分 工 作 ， 此 方 向 是 今 后 的 工 作 重点 。 07年 心 得 原 有 的 操 作 得 到 进 一 步 提 高 ， 大 提 、 病 毒 生 产 都比 较 稳 定 ， 质 量 也 较 好 。 操 作 熟 练 、 条 件 固 定 是主 要 的 因 素 ， 这 些 是 需 要 保 持 和 推 广 的 。 今 年 掌 握 了 不 少 新 技 术 ， 参 与 到 了 各 个 方 向 的 工作 中 ， 今 年 在 技 术 方 面 进 步 比 较 明 显 。 参 与 的 工 作 ， 新 掌 握 的 技 术 增 加 ， 也 反 过 来 显 示出 了 基 础 知 识 的 不 足 ,也 进 一 步 制 约 了 在 技 术 上 的进 步 与 发 展 。 08年 展 望 工 作 重 心 基 本 放 到 HIV中 和 性 单 抗 的 筛 选 上 。进 一 步 学 习 各 方 面 知 识 ， 多 问 多 想 ， 把 技术 做 好 做 精 ， 力 争 成 为 相 关 技 术 的 行 家 。同 时 在 实 验 设 计 和 数 据 分 析 方 面 争 取 有 质的 突 破 。
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