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1、林 亲 雄 阎 春 兰 李 晓 华 一 、 实 验 目 的 二 、 实 验 原 理一 个 典 型 的 生 长 曲 线 分 为 延 缓 期 、 对 数 期 、稳 定 期 和 衰 亡 期 四 个 时 期 微 生 物 数 量 的 测 定 方 法稀 释 平 板 计 数 法显 微 镜 直 接 计 数 法最 大 概 率 法光 电 比 浊 法 稀 释 平 板 计 数 法对 样 品 稀 释 培 养 ， 据 形 成 的 菌 落 数 计 数 。优 点 ： 活 菌 计 数 方 法 ， 对 设 备 要 求 不 高 。缺 点 ： 操 作 复 杂 。显 微 镜 直 接 计 数 法使 用 血 球 计 数 板 在 显 微 镜
2、 下 直 接 计 数 。优 点 ： 操 作 简 便 ， 计 数 直 观 。缺 点 ： 计 数 结 果 为 活 细 菌 和 死 菌 体 的 总 和 。 最 大 概 率 法 待 测 菌 液 经 十 倍 系 列 稀 释 ， 每 稀 释 度 做 3-5个 重 复 ， 经 培 养 后 ， 检 查 细 菌 的 生 长 ， 以 有 细菌 生 长 的 最 后 三 个 稀 释 度 的 管 数 作 数 量 指 标 ，由 数 理 统 计 表 查 出 近 似 值 ， 再 乘 以 数 量 指 标 第一 位 的 稀 释 倍 数 ， 即 为 原 菌 液 中 的 菌 数 。 最 大 概 率 法例 如 ： 某 细 菌 在 稀
3、释 培 养 法 中 生 长 情 况 如 下 ：稀 释 度 ： 10-3 10-4 10-5 10-6 10-7 10-8重 复 数 ： 5 5 5 5 5 5有 菌 生 长 管 数 ： 5 5 5 4 1 0根 据 上 述 结 果 ， 数 量 指 标 为 “ 541” ， 查 表 得 近 似 值 为 17， 乘以 第 一 位 数 的 稀 释 倍 数 ， 得 出 原 始 培 养 物 的 活 菌 数 =17 105个优 点 ： 活 菌 计 数 ， 适 用 于 特 殊 细 菌 。缺 点 ： 计 数 结 果 为 概 值 。 光 电 比 浊 法 是 利 用 在 一 定 的 范 围 内 ， 微 生 物 细
4、胞 浓 度 与 透 光 度 成 反 比 的 原 理 。 当 细 菌 细 胞 在溶 液 中 数 量 越 多 ， 浊 度 越 大 ， 在 光 电 比 色 计 中测 定 时 所 吸 收 的 光 线 越 多 。优 点 ： 简 便 快 速 ， 适 合 于 自 动 控 制 。 缺 点 ： 测 定 结 果 受 培 养 液 成 分 影 响 ； 某 些 样 品 样 品 不 适 合 用 此 法 。 三 、 实 验 器 材 四 、 实 验 步 骤1.样 品 测 试 前 的 调 试 比 色 皿 经 蒸 馏 水 清 洗 后 ， 必 须 经 待 测 样品 润 洗 。 比 色 皿 的 毛 面 用 吸 水 纸 擦 干 ， 而
5、 光面 只 能 用 吸 水 纸 吸 干 ， 以 免 光 面 被 划 破 。 比 色 皿 之 间 吸 光 度 进 行 比 较 。 四 、 实 验 结 果 记 录 不 同 的 OD600值 ，并 绘 制 大 肠 杆 菌 的 生 长 曲 线 。 五 、 思 考 题光 电 比 浊 计 数 的 原 理 是 什 么 ？ 这 种 计 数 法 有 何优 缺 点 ？如 果 用 活 菌 计 数 法 制 作 生 长 曲 线 ， 你 认 为 会 有什 么 不 同 ？ 两 者 各 有 什 么 优 缺 点 ？ 一 、 实 验 目 的 二 、 实 验 原 理 三 、 实 验 器 材 N-乙 酰 葡 糖 胺四 、 实 验 步
6、 骤1.南 湖 水 中 微 生 物 的 测 定 每 个 培 养 皿加 0.1ml 稀释 液 (LTA)2. 微 生 物 的 测 定 用 棉 签 分 别 从 牙 周 、 人 民 币 纸 币 和 门 把 手 表面 挑 取 微 生 物 ， 然 后 放 入 装 有 0.5 ml无 菌 水 的 EP管 中 ， 颠 倒 均 匀 后 ， 用 移 液 器 全 部 吸 入 牛 肉 膏 蛋白 胨 平 板 中 ， 涂 布 均 匀 。3. 微 生 物 的 测 定 将 牛 肉 膏 蛋 白 胨 平 板 盖 揭 开 ， 分 别 置 实 验 台 10，20， 30， 40， 50， 60 min后 ， 盖 上 皿 盖 ， 倒 置 培 养 。4. 微 生 物 的 测 定 取 1 ml涂 布 牛 肉 膏 蛋 白 胨 平 板 。 用 无 菌三 角 瓶 收 集 。 观 测 实 验 结 果 时 间 ？ 五 、 思 考 题
实验五用大肠杆菌生长曲线的测定
