HLAB检测及其临床应用

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1、,,,,,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,2019/12/5,,‹#›,,,,HLA-B27,及其临床应用,什么是,HLA,及,HLA-B27,MHC,、,HLA,、亚型、关联、,RR,HLA-B27,与哪些疾病相关,血清阴性脊柱关节病 类型及特点,强直性脊柱炎 特点及其与,B27,关联机制,HLA-B27,怎么检测,MLCT,、,ELISA,、,IMS-ELISA,、,FCM,、,PCR-SSP,1,HLA,相关概念,主要组织相容性抗原,主要组织相容性复合体（,,MHC,ⅠⅡⅢ,类,),：,H-2,,SLA HLA,MHC,、,HLA,

2、复合体,……,基因,MHC,分子、,HLA,分子,……,抗原,HLA,：,人类白细胞抗原（,Human Leukocyte,Antigen,）,2,HLA,相关概念,,3,不同地区,HLA-B27,亚型的流行病学分布,,欧洲、非洲,2705,、,2702,、,2707,东南亚（印尼、马来西亚、泰国）,2706,、,2704,、,2705,中国,、新加坡、日本,2704,、,2705,、,2707,HLA-B27,相关疾病,,4,疾病,HLA-B27,阳性率,(%),强直性脊椎炎,>90,银屑病性关节炎,,55,Reiter’s,综合症,37,反应性关节炎,,沙门氏菌感染,29.7,志贺氏菌感染

3、,20.7,耶尔森氏菌感染,17.6,淋病双球菌感染,14.0,正常人群,,2,～,7,血清阴性脊柱关节病共同特点,RF,（一,）,家族,聚集,现象,与,HLA-B27,不同程度相关,皆可影响脊柱，都有不同程度的骶髂关节炎，也可影响外周关节,，下肢,关节多于上肢关节，且呈不对称性,。,与革,兰氏阴性杆菌有一定,相关性：,,强直性脊柱炎,与,肠道肺炎克,雷白杆菌,相关,Reiter,综合征与,沙眼衣原体、,福氏痢疾杆菌,相关,,反应,性关节炎与沙门,杆菌,、,痢疾杆菌、耶尔森菌和,HP,相关,5,血清阴性脊柱关节病共同特点,临床上有很多共同或重叠之处：,眼炎，尿道炎，前列腺炎，,,口腔,、肠道和

4、生殖器溃疡,,结节,性红斑，银屑病样,皮疹,,坏死,性脓皮病，,血栓性静脉炎,基本,病理变化以肌腱端周围和韧带附着于骨的部位为主,(,附着端炎,),而非滑膜，也可发生在眼、主动脉瓣、肺实质和皮肤，而不同于以滑膜病变为主的类风湿性关节炎，而且无类风湿皮,下结节。,6,HLA-B27,相关疾病：强直性脊柱炎,Ankylosing Spondylitis,，,AS,患病率：,0.3%,，,20-30,岁，男女,比例,10:1,，有家族倾向；,主要侵犯：中轴关节（骶髂关节,、脊柱骨突、脊柱旁,软组织）,可,伴,发,外周,关节,及,关节,外,表现，严重,者发生脊柱畸形和,关节强直,B27,检测可,作为有

5、相关症状或高危人群,AS,早期的,筛选,方法！,AS,不是,RA,的一,种特殊类型！,,7,,强直性脊柱炎,类风湿性关节炎,地区分布,种族差异大,世界性,性别分布,男＞女,女＞男,年龄,20-30,30-50,家族史,明显,不明显,类风湿因子,（－）,（,,）,HLA-B27,阴性的,AS,约,5-10%,的,AS,患者为,HLA-B27,阴性,AS,患者的,HLA-B27,阳性率达,90-95%,我国汉族人群,HLA-B27,阳性率,2-7%,（,3,千万,-1,亿），,AS,患病率为,0.3%,（＞,4,百万），大部分,HLA-B27,阳性者并不发生,AS,。,HLA-B27,与,AS,

6、8,,HLA-B27,与,AS,9,健康人群,HLA-B27,阳性率及,AS,患病率各地区、种族有显著的差异,HLA—B27,与强直性脊柱炎的发病有很强的相关性,两种错误认识：,HLA-B27,阳性≠,AS,！,HLA-B27,阳性不会转阴！,,HLA-B27,阳性率,AS,患病率,AS,患者,B27,阳性率,中国人,2-7%,0.3%,90,～,95,%,欧洲白种人,4,～,13,％,1,％,80,～,100%,南非黑人,1,％,很低,22%,美国黑人,2,～,4,％,,57%,印地安人,9,～,50,％,6,～,12,％,80,～,100%,HLA-B27,与,AS,的关联机制,连锁不平衡

7、,学说,分子模拟,学说,关节源,性肽假说,其他：,T,细胞受体库假说,,超抗原假说,B27,修饰因子假说,Cys67,模型,10,张谷香．医学综述，,2012,18(4):498-501,HLA,基因座位的等位基因和真正的疾病易感基因处于紧密连锁不平衡，而,HLA,基因本身并不是引起疾病的真正基因，仅仅是遗传标志。,B27,抗原与某些,G,（,-,）菌之间存在类似的分子结构，能发生分子模拟或交叉反应，机体免疫系统把,B27,当作病原体抗原产生免疫应答，对机体产生免疫损害。,认为关节源性肽只存在于关节组织中，特异性地由,HLA—B27,提呈，正常情况下递呈水平低，反应,T,细胞处于耐受状态；当某

8、些具有同源结构蛋白的病毒或细菌感染时，则可致敏耐受的,T,细胞，从而识别以低水平递呈的关节源性肽，引起自身免疫反应而损伤组织。,HLA-B27,检测方法及评价,抗原水平,微量细胞毒法,84%,ELISA,IMS-ELISA 88%,流式细胞术,法,93%,基因水平,PCR-SSP 96%,,11,微量细胞毒法（,microlymphocytotoxic test,，,MLCT,）,原理：如果受试者淋巴细胞,表面表达,有相应的,HLA-B27,抗原,，就可以与,B27,抗体结合，形成,Ag-Ab,复合物激活补体,，,发生,对细胞膜的破坏,及细胞杀伤

9、作用，通过,染色法观察，死细胞的细胞,膜通透性,改变，染料能够进入使之着色，而活细胞细胞膜,完整不被染色,。根据死细胞占全部细胞的百分比，可以判断,受试者,淋巴细胞表面是否,存在,HLA-B27,抗原及其与抗体的,反应,强度,。,优点,：不需特殊仪器设备，,易于操作，一般的实验室都可开展。,缺点,：标本存放不能超过,8,小时；感染可以使细胞膜,表面的,B27,分子的数量或结构,改变，影响,MLCT,的结果，易出现,假,阴性。,12,J.Kirveskari, et al. British Journal of Rheumatology, 1997,36:185-189,ELISA,原理：应用双

10、抗体夹心酶标免疫分析法测定标本,中,HLA-B27,水平。用纯化,的,B27,抗体,包被微孔板,，依次,加入,HLA-B27,抗原（待检标本）、,生物素化,的抗,HLA-B27,抗体、,HRP,标记的亲和素,，形成双抗体夹心反应，经过,彻底洗涤后,用底物,TMB,显色。,TMB,在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,，并,在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品,中的,HLA-B27,呈正相关,。,其,结果,与,MLCT,法符合率,为,99,％，且,不,受感染因素的影响，重复性,好,。,13,瞿良等．实用医学杂志，,2005,19(21):2190-2191,磁珠酶联免疫分析（,IMS-ELI

11、SA,）,磁,珠分离,与,ELISA,结合,B27,单抗标记磁珠,HRP,标记,CD45,单抗,,通过磁场分离游离相,优点：,反应时间短（,1,小时完成）,对,标本新鲜度要求不,高,2,～,8,℃,静,置,4 d,之内,可用,14,杨雅琼等．现代检验医学杂志，,2002,17(2):60-62,流式细胞术法,利用荧光标记的,HLA-B27,单克隆抗体，与细胞表面的,B27,抗原结合，使结合后的淋巴细胞具有一定的荧光强度，这种荧光强度可由流式细胞仪测得的通道值来反映，以其值的高低判断,HLA-B27,抗原表达百分比,，从而,判断,HLA-B27,是否阳性,。,优点：全自动仪器检测，,减少了人为因

12、素的影响,，重复性,高，结果判断准确,，为,目前较为理想的,方法，国外,已将,FCM,法检测,HLA-B27,作为,AS,诊断的常规检测方法。,缺点：仪器,昂贵，目前,只在,较大医院应用，且荧光易淬灭,。,15,Levering WH,，,et al. J],．,Cytometry B Clin Cytom,，,2003,54(1):28-38,．,PCR-SSP,通过,设计基因序列,特异的,引物,SSP,，特异性的扩增出标本中的,HLA-B27,基因片段，以,琼脂糖凝胶电泳,分析,PCR,扩增产物,，若出现,目的条,带则表示,HLA-B27,为阳性。,优点：基因水平的检测,,直接对,HLA-B27,原基因进行扩增分型，灵敏度高，特异性,强。,缺点：耗时长，需要跑电泳，需要特定,的实验仪器及严格的实验条件，,在,临,床,上普遍开展此,项检查,有一定的,难处。,16,Olerup O,．,Tissue Antigens,，,1994,43(4):253-256,,,17,万事有其本源,，,而,不是去教条,的,接受,其存在。,