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1、Click to edit Master text styles,,Second level,,Third level,,Fourth level,,Fifth level,,*,Click to edit Master title style,,微生物发酵工程实验,,,,2010-11,1,实验内容,实验一 机械搅拌发酵系统结构与控制系统,,实验二 中试搅拌发酵罐的使用与维护,,实验三 培养基的分批灭菌,,实验四 磷细菌高密度发酵,,实验五 喷雾干燥,2,,时间安排,11,月,8,、,9,、,12,日下午，熟悉发酵罐系统。,,,11,月,15,日周一，单因子实验，优化磷细菌发酵培养
2、基的碳源。,,11,月,16,日周二下午，,,单因子实验，优化磷细菌发酵培养基的碳源。（完成系列稀释、涂布，发酵液还原糖测定）,,发酵罐开盖，清洗。,,磷细菌种子制备,3,,11,月,17,日周三上午，发酵系统启动，,pH,电极标定，溶氧电极标定，发酵培养基配制、装罐。,,周三下午，培养基分批灭菌。灭菌培养基取样、无菌检查。,,周三晚上，种子无杂菌检查。接种，上罐，发酵控制，接种后取样测定（细菌数量、,pH,、还原糖等）。,,周三晚上，夜班，关注发酵控制参数，,4,,周四上午，取样测定（细菌数量、,pH,、还原糖、杂菌率等）,,周四下午，取样测定（细菌数量、,pH,、还原糖、杂菌率等）,,,周
3、五上午，放罐，清洗发酵罐；计数摇瓶实验结果,,周五下午，喷雾干燥。,5,,优化磷细菌发酵培养基的碳源（单因子实验）,菌种：无机磷细菌,,培养基,,发酵培养基,A,：可溶性淀粉,0.6%,，硫酸铵,0.5%,，硫酸镁,0.06%,，磷酸氢二钾,0.1%,，酵母粉,0.05%,，,pH 7.0-7.5,,发酵培养基,B,：葡萄糖,0.2%,，可溶性淀粉,0.4%,，硫酸铵,0.5%,，硫酸镁,0.06%,，磷酸氢二钾,0.1%,，酵母粉,0.05%,，,pH 7.0-7.5,,发酵培养基,C,：葡萄糖,1%,，硫酸铵,0.5%,，硫酸镁,0.06%,，磷酸氢二钾,0.1%,，酵母粉,0.05%,，
4、,pH 7.0-7.5,,发酵培养基,D,：葡萄糖,1%,，玉米粉,0.6%,，硫酸镁,0.06%,，磷酸氢二钾,0.1%,，酵母粉,0.05%,，,pH 7.0-7.5,,无机磷培养基：葡萄糖,1%,，,(NH,4,),2,SO,4,0.5%,，,NaCl 0.03%,，,KCl 0.03%,，,FeSO,4,·7H,2,O 0.003%,，,MnSO,4,·4H,2,O 0.003%,，,Ca,3,( PO,4,),2,1%,，琼脂,2%,，,pH 7.0-7.5,6,,实验步骤,,配制培养基，分装于,150,或,250,mL,三角瓶，包扎后，,115 ℃,灭菌,20 min,。发酵培养基
5、,A/B/C/D,各,3,瓶。,,接种，接种量,1%,。,,培养，,28 ℃,、,150 rpm,培养,18-24 h.,,测定细胞数量，取发酵液,1,mL,系列稀释，取,0.1,mL,菌液涂布无机磷培养基，,28 ℃,恒温培养,3 d,后计数。,,7,,灭菌培养基无菌度测定,（,1,）显微镜观察法,,利用刚果红染色法可以在显微镜下快速区别死活菌。,,原理：活菌具有排斥染液的能力，而死菌失去了排斥染液的能力，因此，无色透明的是活菌，死菌为蓝色或浅蓝色。,,方法：将待测稀释液与一滴刚果红染色液很薄的均匀涂在载玻片上，风干后滴盐酸,1-2,滴，涂片变蓝，风干后在高倍镜或油镜下观察。,,刚果红溶液：
6、称取刚果红,0.1-0.2 g,，溶于,10 mL,水中。,,盐酸酒精溶液：,95%,酒精,1-2 mL,，蒸馏水,10 mL,，再加入浓盐酸,0.25-0.3 mL,混合即成。,,（,2,）平板培养法,,可取出少量灭过菌的培养基置于,37 ℃,恒温培养箱中培养,24 h,，若无菌生长，即视为灭菌彻底。,8,,磷细菌高密度发酵,菌种：无机磷细菌,,培养基,,种子培养基见讲义第,7,页,,发酵培养基,A,,无机磷培养基见讲义第,7,页,,LB,培养基见讲义第,7,页,,种子制备,,配制种子培养基，分装,100mL/500mL,三角瓶，包扎，,115℃,灭菌,20min,，接种，,28℃,、,150rpm,培养,18-24h,,问题：用于接种发酵罐，接种量,5%,，请问,7L,培养基需要多少菌种用量？,9,,种子接入发酵罐,,种子质量检查,（包括哪些项目？分别用什么方法？）,,接种前还需要做什么？,,火圈接种法,,接种后需要做什么？,发酵参数调试稳定，如温度控制系统，空气流速，罐压，,pH,等。,,培养基灭菌质量检查,,10,,发酵控制,,pH,,泡沫,,菌体浓度和形态,,还原糖,,发酵终点,11,,
微生物发酵工程实验
