脐带间充质干细胞杨洁

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1、,单击此处编辑母版标题样式,,单击此处编辑母版文本样式,,第二级,,第三级,,第四级,,第五级,,,*,单击此处编辑母版标题样式,,,*,单击此处编辑母版文本样式,,第二级,,第三级,,第四级,,第五级,,,,单击此处编辑母版标题样式,,单击此处编辑母版文本样式,,第二级,,第三级,,第四级,,第五级,,*,,*,单击此处编辑母版标题样式,,单击此处编辑母版文本样式,,第二级,,第三级,,第四级,,第五级,,*,,*,,脐带间充质干细胞杨洁,目录,定义,,技术流程,,临床应用,,优势,,前景,,什么是脐带间充质干细胞？,,脐带间充质干细胞（,Mesnchymal Stem Cells,，,MS

2、Cs,）是指存在于新生儿脐带组织中的一种多功能干细胞，它能分化成许多种组织细胞。,,,工艺流程简介,,供者筛选,采集,接收,制备,培养,冻存,复苏,发放,运输,临床应用,信息反馈,,供者筛选,供者需要提供供者的既往病史、现病史、家族史等资料。,,样本采集运输要求,脐带采集标准：,,,1.,脐带长度不得低于,20cm,,2.,脐带两端均在,2-3cm,处结扎,,,3.,脐带保存液在有效期内，并且无明显颜色变化,,,4.,脐带保存瓶无漏液现象，密封严实、无裂横,,,5.,采集套装内容完整，无缺失,,,6.,采集信息登记完整、字迹清楚易辨认,,,7.,脐带运输时间在规定范围内,,,8.,温度控制在适

3、度范围内（,0,度,-25,度）,,样本接收标准,脐带的接收标准：,,,1.样本信息一致、无误，并能追溯至脐带所有人。,,2.母血采集量≥,5,ml,,,脐血检测样本采集量≥,5,ml,,3. 采集套装内容完整，无缺失；采集信息登记完整、字迹清楚易辨认。,,4.无可能造成供者基因型异常的家族史。,,5.供者健康调查表登记信息无异常。,,间充质干细胞的制备方式,,间充质干细胞的制备原理：,,脐带华通氏胶内富含间充质干细胞，通过分离获得华通氏胶后，并进行体外培养，利用间充质干细胞贴壁生长和可体外扩增特性，可获得更多的间充质干细胞。,,组织块分离法,免疫五项检测均为阴性,,间充质干细胞的制备方式,,

4、华通氏胶的提取与培养,,华通氏胶提取：,,1.,消毒,,2.,清洗,,3.,分离出两条动脉和一条静脉,,4.,剥取华通氏胶,,5.,剪碎华通氏胶（大小,1mm3,）,,6.,接种至培养皿培养（密度,2-3g/10cm,皿）,,,,间充质干细胞的制备方式,,注意事项：,,1.,血迹清洗要彻底,,2.,剥取动脉与静脉要干净,,3.,尽量不要剥取羊膜组织,,4.,使用合格器械，器械钝口和生锈的不要使用,,5 .,接种后均匀平铺组织块,,,,,,间充质干细胞原代培养,细胞补液和换液（原代培养）,,,,1.,制备五天补液（观察是否有细胞爬出）,,,,2.,八天换液,,,间充质干细胞的传代,,细胞传代（原

5、代）,,接种时间：细胞融合度,40%-60%,,,,最基本和重要步骤,,间充质干细胞的传代,,细胞传代（非原代）,,接种时间：细胞融合度,≥,85%,,试剂标记、用前复核,,,,间充质干细胞的冻存,细胞收集前须给检测送样做细菌检测和流式（,CD90+,、,CD105+,、,CD166+,）,,,冷冻保护剂（胎牛血清,+DMSO,） 配制：,DMSO 10%,,冷冻方式 深低温冰箱梯度降温,,间充质干细胞的冻存,,注意事项,,,细胞冻存过程,降温要慢，缓慢冷冻,可使细胞内的水分渗出细胞外，减少细胞内冰晶的形成，从而减少由于冰晶形成造成的细胞损伤。,,操作要迅速,,间充质干细胞的复

6、苏,,细胞复苏过程要,迅速,，以降低,DMSO,对细胞的损伤，用生理盐水清洗两遍再接种培养；若直接回输则多洗一变。,,细胞治疗程序,,,1、,治疗前咨询：,,明确诊断,，明确疾病处于哪一期,；,,,,2、治疗风险：,,分析利弊；可能的副作用；获益,,,3、知情同意：,,,治疗前准备,,,1).,安全检测:,菌检；,,2).,个体化治疗方案设计：每一位病人的治疗方案，都根据其评价结果具体制定,;,,3).,需要的细胞数量；,,4).,细胞的使用方法；,,5).,可能出现的不良反应及应对措施。,,,间充质干细胞质量要求,细菌检测,,内毒素检测,,革兰氏检测,,支原体检测,,活性检测,≥,90%,阴

7、性,,细胞发放,,1.,细胞的保存,(,基质：生理盐水或者保存液）,,2.,运输要求：时间、温度,,3.,病人信息填写完整,,4.,样本检测合格,,,MSC治疗禁忌证：,,1.,怀孕。,,2.,精神病。,,3.,严重的心、肝、肾、肺功能不全。,3.,不能控制的严重感染。,4.,合并其他有致命危险的疾病。,,5.,一般受者年龄不超过,65,岁 （,个别患者,>65,岁,）。,,6. 自体免疫性疾病晚期。,,7. 恶性肿瘤,。,,8. HIV 阳性,,,间充质干细胞治疗疾病的原理,替代和修复死亡和受损伤的细胞；,,激活休眠和处于抑制状态的细胞；,,旁分泌作用（分泌神经营养因子、抗凋亡因子等）,,间

8、充质干细胞移植途径,腰穿途径,,静脉途径,,局部种植,,介入途径,,优势,1,、,取材方便,：采集过程简单、无痛苦，不影响母子健康；,,2,、,细胞数量丰富,：增值能力强，可为组织器官的修复和再生提供所需的大量细胞；,,3,、,免疫原性低,：具有独特的免疫调 节功能，自体使用不引起免疫排斥反应，异体移植还可降低免疫反应；,,4,、不涉及社会、伦理及法律方面的更多争议。,,,,脐带间充质干细胞具有哪些临床应用价值？,•,泌尿系统：肾实质的修复；,,•,消化系统：肝组织的修复；,,•,内分泌系统：胰岛细胞的修复；,,•,神经系统：脑、脊髓损伤的修复；,,•,血液系统：化疗、放疗后造血系统 的修复；,,•,循环系统：心肌修复、血管修复；,,•,免疫系统：调节免疫，移植治疗时可降低免疫排斥反应；,,•,衰竭器官的结构和功能的修复和再生：最终替代组织和器官移植。,,前景,,干细胞治疗是继药物治疗、手术治疗之后的又一场医疗革命。目前，发达国家已经开始将干细胞治疗技术用于临床治疗自身免疫性疾病、心肌梗死、脊髓损伤、心力衰竭等疾病。,,,谢谢大家！,,,,,,,,结 语,,