药理学实验课

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1、单击此处编辑母版标题样式,,单击此处编辑母版文本样式,,第二级,,第三级,,第四级,,第五级,,,*,LOGO,单击此处编辑母版标题样式,,单击此处编辑母版文本样式,,第二级,,第三级,,第四级,,第五级,,,*,单击此处编辑母版标题样式,,单击此处编辑母版文本样式,,第二级,,第三级,,第四级,,第五级,,,*,单击此处编辑母版文本样式,,第二级,,第三级,,第四级,,第五级,,,,*,单击此处编辑母版标题样式,,LOGO,药理学实验课,,药理教研室,实验课程简介,实验课程安排,,共18学时,,,（1）实验基本技能,,（2）吗啡镇痛实验,（5）药物对家兔尿量的影响,（6）传出神经药物对家兔血

2、压的影响,（4）药物对家兔离体肠平滑肌的作用,（3）药物抗炎实验,,实验课程学习要求,实验前,实验中,实验后,1.预习实验指导，明确实验目的和要求，充分了解实验方法,,,2.进入实验室，必须穿白大衣.,,3.检查实验器材,,1.根据实验内容进行小组内分工,,2.严格、准确地按照指导中的实验方法进行实验操作。,,3.仔细、真实的记录实验结果。,1.死亡动物放在指定地点；存活动物放入笼内。,,2.将器材洗净擦干，放回原处,,3.每小组轮流负责搞好实验室内卫生 。,,实验课程学习目的,D,B,C,A,巩固药理学基本理论,学习基本的实验方法,培养实事求是的学习作风,培养动手能力、科研能力,,,基本实验

3、操作,不同给药途径的药物对小鼠睡眠时间的影响,药理学实验,一、,,实验目的：,,1,）掌握小鼠给药的基本方法。,,2,）比较不同给药途径药物起效的时间快慢。,,实验原理：不同的给药途径的药物起效时间不相同。,,,,1,实验目的及原理,,实验动物：小鼠,,,实验药物：,1%,戊巴比妥钠,,,2,主要实验材料,,3,,,称重、分组,腹,,腔,,给,,药,皮下给药,灌,,胃,,给,,药,（）,小鼠,翻正反射消失时,,翻正反射再次恢复时间,,主要实验过程,,1,小鼠基本捉拿、固定方法,,2,小鼠基本给药方法,实验基本技能,,右手提起鼠尾,,,左手拇指和食指捏住双耳及头部皮肤，无名指、小指和掌心夹

4、其背部皮肤及尾部,,,便可将小鼠完全固定。如图,-1,。,,单手捉持，用拇指和食指抓住小鼠尾巴，用小指、无名指和手掌压住尾根部，再用腾出的拇指、食指及中指抓住鼠双耳及头部皮肤而固定 。如图,-2,。,图1 图2,,注意事项：,小鼠固定方法,,注意事项：,,,1. 取背部及后腿皮下，注射时用左手拇指及食指轻轻捏起皮肤，右手持注射器将针头刺入，固定后即进行注射。,皮下注射,,注意事项：,,1、针头刺入部位不宜太接近上腹部或太深，以免刺破内脏。针头与腹腔的角度不宜太小，避免刺入皮下。 2、使用针头不宜太粗，避免药液注射后从注

5、射孔流出。注射后可用棉球按一下注射部位。,腹腔注射,,注意事项：,,1.用左手拇指和食指抓住鼠两耳和头部皮肤，其他三指抓住背部皮肤，将鼠抓持在手掌内，固定好动物，头部和颈部保持很平,右手取注射器进行灌胃。2.灌时针头沿鼠口角通过食管进入胃内。灌时如很通畅，则表示针头已进入胃内；如动物有呕吐动物或强烈挣扎，必须拔出后按上述方法重新操作。决不可进针不顺硬向里插。,,灌胃给药,,,（1）注意基本给药途径的正确操作。,,（2）注意小鼠翻正反射消失时间判定,,（＞1min）。,,（3）客观真实的记录实验数据。,,,,4,实验注意事项,,,影响药物起效的因素有哪些？,,请分析本次实验中，那些因素可影响实

6、验结果。,,,,？,仔细观察记录实验,,结果，结合药理学,,总论知识思考，何,,种给药途径起效最,,快。为什么？,,,问题与思考,,吗啡镇痛实验,药理学实验,二、,,实验目的：,,①掌握镇痛药的实验方法。,（热板法、扭体法）,,②观察药物的镇痛作用。,,,实验原理：,热刺激或者化学刺激物使小鼠 产生疼痛反应，观察给药前后小鼠疼痛反应的变化。,（痛阈值、扭体次数）,,,1,实验目的及原理,,实验动物：小鼠,（,雌性,）,,实验药物：,0.4%,吗啡,,,主要仪器：热板测痛仪（,RB-200,智能热板仪,）,,,2,主要实验材料,,3,,,,,设定仪器温度

7、,（55℃）,,,动物初筛,,给药组： 0.4%,吗啡,,给药组：生理盐水,,腹腔注射,,,给药后30min、45min、60min再次测定各组小鼠痛阈值。,,主要实验过程（热板法）,,筛选指标：小鼠的,痛阈值——即小鼠出现疼痛反应的时间。,,,以小鼠添后足作为出现疼痛观察指标。,,,测定2次痛阈值，以痛阈值大于5秒，小于30秒，做为筛选合格动物。,,小鼠筛选方法：,,动物随即分组,给药组： 0.4%,吗啡,,腹腔注射,,30min后各组小鼠均注射0.6%冰醋酸（只）；记录15min内各组小鼠的,扭体次数。,对照组： 生理盐水,,3,,,小鼠扭体反应,,主要实验过程（扭体法）,,热板仪温度设定

8、：,55℃±0.5 ℃。,,室温,:,以15 ～20ºC为宜,。,,热板法中动物性别的选择：,雌性。,,痛阈值判定指标：,添后足。,,痛阈值时间：,初筛（＞5s、＜30s）。 超过60s动物未添足，将动物取出，痛阈值以60s计算。,,实验中保持小鼠,足底及热板内干燥。,,冰醋酸,现用现配。,,,4,实验注意事项,,,两种镇痛模型的区别？,,,吗啡药理学作用、机制？,,,？,,问题与思考,,药理学实验,,,,,,,,抗炎实验,三、,,1.1 实验目的：,,学习利用化学药物或者鸡蛋清制急性炎症动物 模型方法。,,观察糖皮质激素的抗炎作用。,,1.2,实验原理：,,化学刺激物或者蛋清，可致动物急

9、性炎症，出现局部肿胀。比较給予药物前后动物局部肿胀程度的变化从而观察到药物的抗炎作用。,,,,1,实验目的及原理,,实验动物：小鼠、大鼠,（,雄性,）,,实验药物：氢化可的松,,主要仪器（,PV-200,足趾肿胀测定仪,）,,,2,,,主要实验材料,,,,动物称重、分组,,,踝关节的突起点标记，,,作为测量标志（见后图）,,给药组：氢化可的松溶液,,1ml/100g,,体重,对照组：生理盐水,,1ml/100g,,体重,腹腔注射,,,30min， 从右后足掌心向掌跖关节方向进针，皮下注射新鲜蛋清。 (见后图),,注射蛋清后30min、60 min、90min，测量右后足的体积，,,,,3,实验

10、主要步骤（大鼠足肿胀）,,皮下注射新鲜蛋清,大鼠足外踝标记,实验照片,,小鼠称重、标记、分组,给药组：氢化可的松,,腹腔注射,,,,30min后用二甲苯50μl均匀涂抹每只鼠的右耳,,,对照组： 生理盐水,,3,,,,,,90mim后小鼠脱臼处死，分别用打孔器取相同部位左右耳片，电子天平称重。,,主要实验步骤（小鼠耳肿胀）,,抗炎实验中动物性别的选择：,雄性,。,,测定大鼠足体积时，选定,统一测量位置,（大鼠足外踝关节突起）。,,小鼠耳廓滴加二甲苯时，正反面均匀涂抹。避免滴入耳廓内。,,小鼠左右耳,打耳片位置统一,（耳廓中间部位）。,,,4,实验注意事项,,,,,炎症的表现以及炎症的类型有哪些

11、？,,,？,,本实验中选择雄性动物的原因？,问题与思考,,常见炎症模型介绍,1,非特异性炎症模型：急性,,大鼠足肿胀,,小鼠耳肿胀,,白细胞游走法,2,非特异性炎症模型：慢性,,棉球植入法,,大鼠巴豆气囊法,,3,免疫性炎症,,,弗氏完全佐剂致炎法,,药理学实验,,,药物对家兔离体肠平滑肌的作用,四、,,1.1 实验目的：,,学习离体平滑肌器官的实验方法。,,观察拟胆碱药和抗胆碱药对离体家兔肠平滑肌的作用。,,1.2,实验原理：,,乙酰胆碱通过激动,M,受体兴奋胃肠平滑肌；阿托平可阻断,M,受体；氯化钡直接兴奋胃肠平滑肌。,,,,1,实验目的及原理,,2,,,主要实验材料,实验动物：家兔,,实

12、验药物：乙酰胆碱溶液（,1:10,万）、,0.1%,硫酸阿托品溶液、,1%,氯化钡溶液,,主要仪器：离体平滑肌槽、生物机能系统,,,,3,①,离体肠肌的制备,,取,,回,,肠,,置,,冷,,台,,氏,,液,,中,,,制,,备,,离,,体,,肠,,肌,,家,,兔,,处,,死,实验主要步骤1,,,,3,②,安装离体实验装置,在浴槽（大试管）中，,,加入台氏液至标线处，,,加热，维持水温38°C±0.5°C。,实验主要步骤2,,,,3,③,安装离体实验装置,取回肠，固定于平滑肌槽内,调整悬挂丝线松劲程度,,调节通气阀每秒钟1-2个气泡,点击桌面中BL-420图标，进入主菜单,实验主要步骤3,,,,实

13、验主要步骤4,正常曲线,乙酰胆碱,,阿托品,乙酰胆碱,1. 肠管稳定10分钟，记录一段正常活动曲线 。,2. 加入1:10万乙酰胆碱溶,，,记录其收缩幅度,3. 收缩到最高点时，立即加入0.1% 硫酸阿托,。,观察结果。,4. 平滑肌收缩稳定后，再加入1:10万乙酰胆碱溶液，相比较，观察结果有何不同。,,3,④,添加药液,,,,实验主要步骤5,Bacl,2,乙酰胆碱,,加入1% 氯化钡溶液1ml,待作用至最高点时，加入0.1% 硫酸阿托品溶液，再次观察结果。,3,④,添加药液,,冲洗和分离肠管时动作应轻柔，尽量避免牵拉肠管。,,肠管穿线时，对角线穿过肠壁，只需穿过一层肠壁。,,台氏液应

14、保持在38±0.5°C，换液时，台氏液亦应38±0.5°C。,,加药时不要把药液直接加到回肠上，以免影响结果。,,浴温和肠肌的张力均可影响实验结果，应注意调节。,,,4,实验注意事项,,,,,阿托品是否对于乙酰胆碱和氯化钡均有拮抗作用？,？,,实验中能影响离体肠肌收缩活性的必要条件有哪些？,问题与思考,,药理学实验,四、,药物的利尿作用,,1.1 实验目的：,,,学习学习利尿的实验方法,.,,,观察利尿药对尿量的影响。,,1.2,实验原理：,,呋噻米属高效利尿药，通过抑制髓袢升枝粗段对氯化钠的重吸收而达到利尿作用 。,,,,1,实验目的及原理,,2,,,主要实验材料,实验动物：,雄性家兔，体重

15、,2— 3kg,,,,实验药物：,3%,戊巴比妥钠、,1%,呋噻米、,,主要仪器：,烧杯、膀胱漏斗、,10 ml,量筒。,,,1、 取家兔1只，称重，清水灌胃30ml/kg,,,,3,实验主要步骤1,,2、30min后，用3%戊巴比妥钠1 ml/kg经耳缘静脉注射麻醉,实验主要步骤2,,3、家兔背位固定于兔台上。耻骨联合前正中切开腹部皮肤4～6 cm，暴露膀胱,。,,实验主要步骤3,,4、分离输尿管，结扎尿道内口。在膀胱游离部作荷包缝合，然后剪开小口插入膀胱漏斗并固定。,,实验主要步骤4,,5、记录10分钟正常尿量；耳缘静脉注入呋噻米，观察并记录各药给药后10 min尿液滴数及尿量。,,实验主

16、要步骤5,,,家兔麻醉过程中，,控制麻醉药推注速度，,密切观察实验过程中家兔情况。,,手术过程中，动作轻柔，以免损伤膀胱。,,准确找到输尿管，,注意输尿管的生理比邻位置。,,,,4,实验注意事项,,,,,？,,呋塞米强大利尿作用的原因是什么？,,尿液生成的正常过程？,问题与思考,,药理学实验,传出神经系统药物对家兔动脉血压的影响,五、,,1.1 实验目的：,,学习麻醉动物急性血压实验的方法 。,,观察传出神经药物对动物血压的影响 。,,1.2,实验原理：,,盐酸肾上腺素溶液 、酚妥拉明溶液等药物能与心肌或者血管平滑肌上的相应受体结合，从而影响家兔的血压。,,,,1,实验目的及原理,,2,,,主

17、要实验材料1,,实验动物：家兔,,实验药物：,3%,戊巴比妥钠溶液、,0.001%,肾上腺素溶液、,0.001%,去甲肾上腺素溶液、,0.001%,异丙肾上腺素溶液、酚妥拉明,（,1%,溶液,）,,、普萘洛尔（,0.01%,溶液）、乙酰胆碱（,0.001%,溶液） 、阿托品（,0.01%,溶液）,.,,,2,,,主要实验材料2,主要仪器：压力换能器、,BL-420,生物机能实验系统、手术刀、手术剪、止血钳、气管插管、动脉插管、动脉夹、头皮静脉注射针头等。,,,,3,①,麻醉与手术,称重、麻醉、固定,,腹腔注射3%戊巴比妥钠1ml/kg,耳缘静脉，建立静脉输液通道,颈正中切口，分离气管；插入气管

18、插管,,实验主要步骤１,,实验照片,分离气管,气管插管,,,,3,①,麻醉与手术,分离得到颈总动脉,颈总动脉插管,气管一侧的颈动脉鞘内分离颈总动脉，进行,,颈总动脉插管,,实验主要步骤２,,,,3,②,连接实验仪器,连接压力换能器后，打开电脑，,,点击桌面上的BL-420图标，进入血压实验系统。,,实验主要步骤３,,异丙肾上腺素,,（,）,,普萘洛尔,,（,）,,异丙肾上腺素,,（,）,,,,肾上腺素,,（,）,,去甲肾上腺素,,（,）,,酚妥拉明（,0.1ml/kg),,,肾上腺素,,（,）,,,,乙酰胆碱,,（,）,,阿托品,,（,）,,乙酰胆碱,,（,）,作用于,,α、β受体,,的药物,,作用于,,β受体,,的药物,,作用于M,,受体的,,药物,,,3,③,依次给予药物,实验主要步骤４,,静脉插管过程容易发生出血，操作应仔细、小心。,,每次给药后，都要输入3ml生理盐水，将药物完全冲入血管内。,,随时注意插管位置，特别在挣扎时，避免扭转而阻塞血流或刺破血管。,,两次给药之间须等待血压恢复正常。,,,4,实验注意事项,,,,,不同药物对于家兔血压、心率的影响如何？,,？,,先加入酚妥拉明在加入肾上腺素，血压的变化情况与第一次加入肾上腺素有何变化？为什么？,问题与思考,,