水产动物营养与饲料课件

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1、单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,水产动物营养与饲料科学实验指导,实验一 鱼虾饲料的总消化率及其蛋白质消化率的测定,【,实验目的,】,掌握用外源指示剂,Cr,2,O,3,间接测量鱼、虾饲料消化率的基本方法。,【,实验原理和基础知识,】,与饲料均匀混合的外源指示剂,Cr,2,O,3,完全不被动物吸收而随粪便排出。根据指示剂及蛋白质,(,或其他营养成分,),在食物及粪便中的含量变化。饲料的总消化率和蛋白质的消化率由如下两式给出：,饲料总消化率：,D(,)=1,B,B,、,100,蛋白质消化率：,D,、,(,)=1-(A,、,A,B,B,、,),

2、100,A,、,A,、分别为饲料和粪便中的粗蛋白含量。,B,、,B,、分别为饲料和粪便中的,Cr,2,O,3,含量。,【,实验用品,】,1,、实验鱼可根据实际情况选择实验鱼的种类，但易于驯化、习惯实验环境的鱼类,(,如：金鱼、锦鲤、罗非鱼等,),较好。体重,20,25g,，每试验组,10,尾。,2,、水族箱每试验组配,50,100L,容积的水族箱,2,个，一个作投饲槽、一个作排泄槽。,3,、充氧设备每水族箱配微型充气泵一台。,4,、集粪工具每组配虹吸管,1,支、漏斗,2,个。,5,、小捞网,1,个。,6,、,100,目分样筛,1,个。,【,实验操作步骤,】,1,、试验饲料的制备,试验饲料可直接

3、用市售鱼、虾饲料，经重新粉碎后使用。所有干性原料要经粉碎，并通过,100,目筛。化学纯,Cr,2,O,3,也要经过,100,目筛。按每千克干饲料的,1,准确称取,Cr,2,O,3,，与少量的干性原料混合，分四次逐步扩大到全部干性饲料组分，充分混合均匀，混合操作可在大白搪瓷盆进行。因,Cr,2,O,3,为绿色，所以从盆壁上是否留有团状绿色痕迹来判断混合的均匀程度。混合均匀程度决定试验的成败。平均每组制作,200g,饲料。,2,、投饲与粪便采集,把试验鱼置于投饲槽、充气，用试验饲料暂养,3,天。每天清理粪便及残饵，并适量换水。停食数小时后，再一次投足量试验饲料让鱼群饱食。然后用捞网把鱼捕到条件完全

4、相同的排泄槽开始观察排粪，排粪后及时用虹吸管收取，经过滤，收集烘干，保存分析用。虹吸过程尽量不要把条状粪便弄破。,为了获得可靠的结果，通常要同时作三个重复组，或把排粪后的鱼再移回投饲槽喂饱，再移到排泄槽，再收集粪便，如此重复两次。但这里仅为了掌握基本方法、收集足够供分析的粪便即可,(,约,300mg,干品,),。,3,、样品分析,（,1,）饲料中干物质的测定。,（,2,）饲料中灰分的测定。,（,3,）饲料中粗蛋白质的测定。,（,4,）,Cr,2,O,3,的湿式灰化定量法。,4,、消化率的计算及不同实验组间的结果比较：,根据凯氏定氮法测得的饲料及粪便的蛋白质水平，以及以上获得,Cr,2,O,3,

5、数据，用上述计算公式，便可算出饲料的总消化率及蛋白质消化率。因为不同试验组所用的试验饲料一样，试验鱼及试验条件相似，方法相同，所以其结果有很强的可比性。各试验组可将试验结果与其他组的结果进行比较，并予讨论。,【,作业与思考,】,1,、试验鱼的暂养应注意哪些方面？,实验二饲料中干物质的测定,【,实验目的,】,测定饲料中干物质质量,【,实验原理和基础知识,】,饲料中营养物质，包括有机物质和无机物质均存在于饲料的干物质中。饲料中干物质含量的多少与饲料的营养价值及家畜的采食量均有密切关系。风干饲料例如各种籽实饲料、油饼、糠麸、藁秕、青干草、鱼粉、血粉等可以直接在,100,105,温度下烘干，烘去饲料中

6、蛋白质、淀粉及细胞膜上的吸附水，得到风干饲料的干物质量百分比。含水分多的新鲜饲料如青饲料、青贮饲料、多汁饲料以及畜类和鲜肉等均可先测定初水分后制成半干样本；再在,100,105,温度下烘干，测得半干样本中的干物质量，而后计算新鲜饲料或鲜粪或肉中干物质量百分比。,【,实验用品,】,一、实验器材,1,、一个学生做,2,个测定所需仪器数量,称量瓶：铝质、带盖、容量为,30,毫升,2,个,干燥器：,30,厘米直径,1,个,坩埚钳：,1,把,精密天平：,1,架,药匙：,1,个,小毛刷：,1,把,2,、公用仪器,鼓风烘箱：,100,105 1,台,二、试剂,硅胶,500,克,凡士林,10,克,以上均为干燥

7、器用,【,实验操作步骤,】,1,、用普通天平称出,200,300,克刚采集的样品,(,实验鱼的粪便,),，放入,60,70,烘箱中，,5,6,个小时后取出。磨碎，制得半干样本。,2,、将洗净的称量瓶放在,100,105,的鼓风烘箱内，开盖烘,1,小时。用坩埚钳取出称量瓶，并移入干燥器中冷却约,30,分钟后，称重,(,称量瓶放入烘箱时须启盖，冷却和称重时须严盖,),。,3,、在称量瓶中称取,2,克风干样本,(,实验饲料,),和半干样本。将称量瓶和样本放入,100,105,烘箱内，将瓶盖揭开少许。,4,、样本在烘箱内烘,5,6,小时后紧盖瓶盖，移入干燥器中，冷却,30,分钟，进行第一次称重。,5,

8、、按照上述方法，继续将称量瓶放入烘箱内，烘,1,小时后进行第二次称重，直至前后两次称重的差数在,0.002,克。,6,、干物质计算值采用数次称重的最低值。,7,、称量瓶中的干物质保留作测定粗蛋白。,【,结果计算与方法,】,1,、风干样本,(,或半干样本,),中,105,干物质,式中：,W,1,=,称量瓶重,(,克,),W,2,=,称量瓶重,(,克,)+,风干样本重,(,克,),W=W,2,-W,1,=,风干样本重,(,克,),W,3,=,称量瓶重,(,克,)+105,干物质重,(,克,),【,注意事项,】,本试验所用鼓风烘箱测定饲料样本中干物质的方法，并不是绝对正确的。有以下几个可能，会引起测

9、定结果的误错。,1,、加热时样本中挥发性物质可能与样本中水分一起损失，例如，青贮料中的挥发性脂肪酸。,2,、样本中有些物质如脂肪，在加热时可能在空气中氧化，使样本重量不但不减少，反而会增加。在这种情况下，测定样本中干物质需在真空烘箱或装有二氧化碳的特殊烘箱中进行。,3,、有些饲料，在,105,时可能发生某些化学变化。例如，含糖分高的糖浆。这类饲料应在较低温度和减压条件下进行干燥。,【,作业与思考,】,1,、某种饲料半干样本,105,干物质百分比为,90,，该饲料空气干燥干物质为,30,，计算该种新鲜饲料的干物质百分比。,实验三粗蛋白质的测定,(,凯氏定氮法,),【,实验目的,】,1,、掌握饲料

10、中粗蛋白质测定方法。,2,、测定各种样本的粗蛋白质含量。,【,实验原理和基础知识,】,饲料中含氮物质包括纯蛋白质和氨化物,(,氨化物有氨基酸、酰胺、硝酸盐及铵盐等,),，两者总称为粗蛋白质。凯氏定氮法的基本原理是用浓硫酸分解样本中蛋白质与氨化物，使它们含氨物都转变成氨气，氨气被浓硫酸吸收变为硫酸铵。硫酸铵在浓碱的作用下放出氨气。通过蒸馏，氨气随汽水顺着冷凝管流入硼酸溶液，与之结合成为四硼酸铵，后者用盐酸或硫酸标准液滴定，即可测定放出的氨氮量。根据氮量，乘以特定系数，一般为,6.25,，即可得出样本中粗蛋白质含量。上述过程中的化学反应如下：,2CH,3,CHNH,2,COOH+13H,2,S0,

11、4,(NH,4,),2,S0,4,+6C0,2,+12S0,2,+16H,2,O,(NH,4,),2,S0,4,+2NaOH,2NH,3,+2H,2,0+Na,2,S0,4,4H,3,B0,3,+NH,3,NH,4,HB,4,0,7,+5H,2,0,NH,4,HB,4,0,7,+HCI+5H,2,0,NH,4,CI+4H,3,B0,3,【,实验用品,】,一、实验器材,1,、一个学生做,2,个测定，所需,仪器,数量,凯氏烧瓶,100,毫升,2,个,分析天平,1,架,玻璃珠,6,粒,量筒,50,毫升,1,个,漏斗,46,厘米直径,2,个,容量瓶,100,毫升,2,个,三角瓶,150,毫升,26,个

12、,滴定管,1,支,移液管,10,或,5,毫升,1,支,2,、,公用仪器,数量,量筒,5,毫升,2,个,量筒,10,或,20,毫升 各,1,个,半微量凯氏蒸馏器,1,套,电炉,1000,瓦,1,个,蒸气发生瓶,3000,毫升、平底短颈,1,个,定时钟,1,个,毒气柜,1,架,二、试剂,一个学生做,2,个测定所需药品数量,粉末硫酸钾,-,硫酸铜混合物,(3,：,1,研磨混匀,)0.5,克,硫酸,(,比重,1,84,，无氮,)24,毫升,硼酸溶液,2,20,毫升,氢氧化钠溶液,30,40,毫升,甲基红一甲烯蓝混合指示剂,1,毫升,(,取,200,毫升,0,1,甲基红乙醇溶液与,50,毫升,1,甲烯蓝

13、乙醇溶混匀。此混合指示剂在碱性溶液呈绿色，在酸性溶液紫红色,),标准盐酸溶液,(0.01,摩尔升。,)600,毫升,【,实验操作步骤,】,1,、凯氏定氮仪的构造和安装,凯氏定氮仪由蒸汽发生器、反应管及冷凝器三部分组成。蒸气发生器包括电炉及一个,1.2,升的烧瓶。蒸气发生器借橡皮管与反应管相连，反应管上端有一个玻璃杯，样品和碱液可由此加入到反应室，反应室中心有一长玻璃管，其上端通过反应室外层与蒸气发生器相连，下端靠近反应室的底部。反应室外层下端有一开口，上有一皮管夹，由此可放出冷凝水及反应废液。反应产生的氨可通过反应室上端细管及冷凝器通到吸收瓶中，反应管及冷凝管之间借磨口连接，防止漏气。,安装仪

14、器时，先将冷凝管垂直地固定在铁架台上，冷凝管下端不要距离实验台太近，以免放不下吸收瓶。反应管固定在另一铁架，蒸气发生器放在电炉上，安装完毕不得轻易移动。,2,、消化,(1),称取饲料样本,0.5,克两份，粪便样本,0.5,克两份，将称样纸卷成筒状，小心无损地将样本放入,100,毫升洗净烘干的凯氏烧瓶中。另取,2,个凯氏烧瓶作为对照，测定试剂中可能含有的微量物质。,(2),分别加入硫酸钾硫酸铜混合物,0.2,克，浓硫酸,5,毫升。再加玻璃珠,2,粒，以防消化时液体溅失。,(3),在凯氏瓶上加一个小漏斗，将凯氏烧瓶放在消化架的电炉上加热。开始加热时，先用小火，以免瓶内产生大量泡沫，溢出瓶口。等泡沫

15、停止产生后，再加强火力。消化时经常转动烧瓶，使全部样本浸入硫酸内。如有黑泡溅在瓶壁，应待烧瓶冷却后加少量蒸馏水冲洗之，再继续加热消化。如有黑炭粒不能全部消化，则待烧瓶冷却后，补加少量浓硫酸，继续加热，直至瓶内溶液澄清呈透明淡绿色为止，消化才告完毕。,一般饲料消化需,3,4,小时，消化过程中产生,SO,2,，有刺鼻味，故需在毒气柜中进行。,(4),烧瓶冷却后加蒸馏水,10,毫升，摇匀，然后将烧瓶中溶液无损地移入,50,毫升容量瓶内，用蒸馏水冲洗凯氏烧瓶数次，洗液亦注入容量瓶中，并以蒸馏水稀释至刻度，混匀备用。,3,、蒸馏,(1),蒸馏器的洗涤：蒸气发生器中盛有几滴硫酸酸化的蒸馏水，关闭皮管夹，将

16、蒸馏发生器的水烧开，让蒸气通过整个仪器。,15,分钟后，在冷凝器下端放一个盛有,5,毫升,2,硼酸溶液和,1.2,滴指示液的锥形瓶。冷凝管下端应完全浸没在液体中，继续蒸馏,1.2,分钟，锥形瓶内的溶液如不变色则证明蒸馏器内部已洗涤干净。移开锥形瓶通气,1,分钟，用水冲洗冷凝管口，然后用手涅紧橡皮管，由于反应外层蒸气冷缩，压力减低，反应室凝结的水可自动吸出进入，打开皮夹将废水排出。,(2),取,50,毫升锥形瓶数个，各加入,5,毫升,2,硼酸溶液和混合指示剂,2,滴，置于蒸馏装置的冷凝管下，使管口浸入硼酸溶液内。,(3),煮沸蒸气发生瓶中蒸馏水。用移液管取,10,毫升消化液，细心地由凯氏蒸馏装置上的小玻杯注入反应室，将小玻杯棒状玻璃塞塞紧，使之不漏气。取,10,毫升,30,的氢氧化钠溶液注入小玻杯，小心地轻轻提起棒状玻塞，使氢氧化钠溶液流入反应室，立刻将玻塞盖紧，加水于小玻杯，使少许水流入反应室以洗涤碱液，部分水留于小玻杯，以防漏气。夹紧外套管出口的橡皮管，开始蒸馏。蒸气吹入反应室，用定时钟定时，使氨气通过冷凝管流入锥形瓶的硼酸溶液中，此时锥形瓶中的溶液由紫色变成绿色，蒸馏,3-5,分钟