微生物实验第次实验课

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1、单击此处编辑标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,第三次实验,实验内容,热力对细菌繁殖体和芽胞的杀菌作用：（1套/组）,紫外线的杀菌作用：（1个/组）,抗生素敏感试验：（1套/组）,细菌耐药性变异（示教）,细菌的鞭毛变异（示教）,高压灭菌器的使用（讲解）,细菌分离鉴定程序（讲解）,全自动微生物生化分析仪简要操作规程（讲解、参观）,物理消毒灭菌法,掌握的概念：,消毒：指杀死物体上病原微生物的方法。但是不一定能杀死细菌的芽胞和某些非病原菌。,灭菌：指杀死物体上所有微生物的方法。包括病原菌和非病原菌，细菌的芽胞和繁殖体。,,物理消毒灭菌法,分类：,热力、紫外线、电力辐射

2、、超声波等。,热力灭菌法：干热灭菌法与湿热灭菌法。,使菌体蛋白氧化变性、碳化或使电解质浓缩，导致细胞死亡。,使菌体蛋白变性或凝固，或导致细胞膜功能受损而致细胞质内容物漏出。,一、热力对细菌芽胞和繁殖体的杀菌作用,材料,肉汤培养基：6支（2人/组）,菌种：大肠杆菌斜面培养物、枯草杆菌斜面培养物,方 法,接种大肠杆菌,接种枯草杆菌,第一步：接种细菌,,方 法,第二步：分组处理,大肠杆菌,枯草杆菌,大肠杆菌,大肠杆菌,枯草杆菌,枯草杆菌,第一组,第二组,第三组,对照,（直接放37℃ 培养）,100℃煮沸10min,121℃高压灭菌20min,冷水冲凉,三组均放于37℃孵箱中培养18～24小时，观察结

3、果并分析产生结果的原因。,方 法,第三步：培 养,高压灭菌器的使用,原理：蒸汽被限制在密闭的容器中，随着压力的升高，蒸汽的温度也相应升高。在103.4kpa蒸汽压下，温度达到121.3℃，维持15-20min，可杀死包括细菌芽胞在内的所有微生物。,锅盖,内锅,外锅,结 果,菌膜,(表面生,长,长),均匀浑浊,生长,沉淀生长,对照:两,管,管均有细,菌,菌生长;,100℃,煮,煮沸10min:,枯草杆菌,有,有生长,,形,形成菌膜;,大肠杆菌,无,无生长。,高压灭菌:,两管均无,细,细菌生长.,,,结 果,普通条件,培,培养下细,菌,菌生长状,况,况,枯草杆菌,大肠杆菌,100℃,灭,灭菌后

4、细,菌,菌生长状,况,况,枯草杆菌,大肠杆菌,三、紫外,线,线的杀菌,作,作用,紫外线的,特,特点：,穿透力较,弱,弱，可被,普,普通的玻,璃,璃、纸张,、,、尘埃、,水,水蒸气等,阻,阻挡，只,用,用于手术,室,室、传染,病,病房、实,验,验室或不,耐,耐热物品,的,的表面消,毒,毒。,波长在200～300nm,的,的紫外线,具,具有杀菌,作,作用，以265～266nm的紫外,线,线杀菌作,用,用最强。,,主要是使,同,同一股DNA上相,邻,邻的嘧啶,通,通过共价,键,键结合成,二,二聚体，,影,影响DNA正常碱,基,基配对，,干,干扰DNA的复制,与,与转录，,引,引起细菌,的,的突变或,

5、死,死亡；还,能,能使空气,中,中的氧转,化,化为臭氧,而,而具有杀,菌,菌作用。,原 理,普通琼脂,平,平板（1,个,个/2人,）,）,菌种：金,黄,黄色葡萄,球,球菌液体,培,培养基,接种环,紫外灯,材 料,方 法,1、取2,～,～3环菌,液,液于平板,中,中央；,2、接种,环,环涂均匀,；,；,3、放紫,外,外线灯箱,，,，用平板,盖,盖盖住1/2平皿,，,，照射30min,；,；,4、取出,后,后放37,℃,℃培养24h观察,结,结果。,紫外线照,射,射一侧无,细,细菌生长,。,。,结 果,照射,一,一侧,未照,射,射一,侧,侧,四、,抗,抗生,素,素敏,感,感实,验,验,纸片,法,法

6、原,理,理,一定,大,大小,的,的浸,沾,沾了,一,一定,的,的稀,释,释度,的,的抗,生,生素,的,的滤,纸,纸片,，,，贴,附,附于,已,已涂,满,满被,测,测细,菌,菌的,琼,琼脂,平,平板,上,上，,孵,孵育,后,后因,药,药物,的,的抑,菌,菌作,用,用及,渗,渗透,性,性，,纸,纸片,周,周围,可,可出,现,现透,明,明的,抑,抑菌,圈,圈。,根,根据,抑,抑菌,圈,圈的,有,有无,和,和大,小,小，,从,从而,测,测知,被,被测,细,细菌,对,对抗,生,生素,是,是否,敏,敏感,。,。,菌种,：,：大,肠,肠杆,菌,菌和,葡,葡萄,球,球菌,肉,肉汤,培,培养,物,物,普通,琼,

7、琼脂,平,平板,（,（1,个,个/,人,人）,接,种,种,环,环,、,、,镊,镊,子,子,抗,生,生,素,素,纸,纸,片,片,：,：,青,青,霉,霉,素,素,、,、,链,链,霉,霉,素,素,、,、,复,复,方,方,新,新,诺,诺,明,明,、,、,环,环,丙,丙,沙,沙,星,星,材,料,料,方,法,法,青,链,复,环,1,、,、,用,用,接,接,种,种,环,环,将,将,菌,菌,液,液,均,均,匀,匀,的,的,涂,涂,抹,抹,于,于,平,平,板,板,表,表,面,面,（,（,方,方,法,法,同,同,紫,紫,外,外,线,线,）,）,；,；,2,、,、,在,在,平,平,板,板,底,底,部,部,用,用,蜡

8、,蜡,笔,笔,分,分,成,成4,区,区,；,；,3,、,、,镊,镊,子,子,烧,烧,灼,灼,灭,灭,菌,菌,、,、,冷,冷,却,却,，,，,夹,夹,取,取,纸,纸,片,片,放,放,于,于,各,各,区,区,；,；,4、,作,作好,标,标记,放,放37℃,培,培养24h测,量,量抑,菌,菌圈,的,的大,小,小，,判,判断,结,结果,。,。,注意：,1、镊,子,子冷却,后,后才能,夹,夹取纸,片,片；,2、纸,片,片间距,离,离不能,太,太密。,含药物,的,的滤纸,片,片,含菌平,板,板,抑菌圈,37℃,培,培养,结 果,复,链,青,环,复,环,青,链,,葡萄球,菌,菌,大肠杆,菌,菌,绿脓杆,菌,

9、菌,五、耐,药,药性变,异,异,细菌产,生,生抗药,性,性的机,制,制：,改变药,物,物作用,机,机制；,产生各,种,种钝化,酶,酶；,R,质,质,粒,粒,编,编,码,码,乙,乙,酰,酰,转,转,移,移,酶,酶,、,、,磷,磷,酸,酸,转,转,移,移,酶,酶,、,、,腺,腺,苷,苷,转,转,移,移,酶,酶,；,；,改,变,变,细,细,胞,胞,膜,膜,通,通,透,透,性,性,。,。,方,法,法,不,耐,耐,青,青,霉,霉,素,素,耐,青,青,霉,霉,素,素,六,、,含0.1%,石,石,炭,炭,酸,酸,琼,琼,脂,脂,培,培,养,养,基,基,无,无,此,此,现,现,象,象.,普,通,通,琼,琼,脂

10、,脂,培,培,养,养,基,基,迁,徙,徙,生,生,长,长,七,、,、,全,全,自,自,动,动,微,微,生,生,物,物,生,生,化,化,分,分,析,析,仪,仪,VITEK,,2,系,统,统,简,简,易,易,操,操,作,作,规,规,程,程,介,介,绍,绍,主,机,机,聪,明,明,仪,仪,（,一,一,）,）,基,基,本,本,功,功,能,能,1,、,、,从,从,分,分,离,离,菌,菌,落,落,中,中,对,对,微,微,生,生,物,物,进,进,行,行,鉴,鉴,定,定,；,；,2,、,、,对,对,分,分,离,离,菌,菌,株,株,进,进,行,行,抗,抗,生,生,素,素,敏,敏,感,感,试,试,验,验,；,；

11、,3、以MIC比较,分,分析为基,础,础利用高,级,级专家系,统,统来进行,菌,菌株耐药,表,表型分析,。,。,（二）卡,片,片,1、鉴定,卡,卡,GNB/GN,革兰阴性,杆,杆菌鉴定,卡,卡；,GPC/GP,革兰阳性,球,球菌鉴定,卡,卡；,YST,酵,酵母菌鉴,定,定卡；,BBL,需,需氧芽孢,杆,杆菌。,2、VITEK2卡片细,菌,菌鉴定原,理,理,是一组放,在,在64个30,,l 容积,小,小孔的标,准,准化及微,量,量化试验,。,。这些小,孔,孔放有一,些,些乾燥的,反,反应培养,基,基，被测,试,试的菌液,是,是接种到,这,这些培养,基,基上。每,个,个小孔代,表,表一个生,化,

12、化反应，,有,有些小孔,是,是用作读,数,数对照。,细,细菌的新,陈,陈代谢令,孔,孔内底物,在,在培养过,程,程产生反,应,应，从而,使,使荧光物,产,产生变化,，,，每15,分,分钟仪器,会,会以波长365nm的激,发,发光照射,每,每个生化,接,接收二极,管,管收集激,发,发后产生,的,的445nm波,长,长的光讯,号,号。这里,有,有两种荧,光,光指标要,检,检测 :,微,微生物的,新,新陈代谢,导,导致pH,值,值改变,、,、酶的活,性,性。,3、药敏,卡,卡,AST-GNxx,革兰阴性,杆,杆菌药敏,卡,卡,,AST-Pxxx,革兰阳性,球,球菌药敏,卡,卡,4、药敏,试,试验的主

13、,要,要原理,仪器会连,续,续分析64-孔试,卡,卡（微孔,内,内）内的,细,细菌生长,。,。每孔都,放,放有一种,抗,抗生素，,并,并且能产,生,生微需氧,及,及其他有,利,利细菌生,长,长的条件,。,。,（三）操,作,作规程,1.分纯,细,细菌，18-24,小,小时培养,物,物（新鲜,菌,菌）,2.根据,细,细菌选卡,片,片，恢复,室,室温。,3.按表,一,一建议配,制,制菌悬液,4.根据,自,自身需要,选,选择药敏,卡,卡。,5.在SCS操作,台,台完成初,步,步资料输,入,入。,6.船架,放,放入仪器,，,，关闭外,门,门。,7.仪器,自,自动完成,核,核对，稀,释,释，填充,，,，切

14、割，,封,封闭及上,卡,卡，卸卡,。,。,八、细菌,的,的分离鉴,定,定程序,标本的采,集,集与送检,应,应注意的,问,问题：,1、注意,无,无菌操作,，,，避免正,常,常菌群污,染,染；,2、根据,致,致病菌在,体,体内分布,和,和排出部,位,位不同采,取,取标本；,3、应在,使,使用抗生,素,素前采标,本,本；,4,、,、,采,采,集,集,病,病,变,变,明,明,显,显,部,部,位,位,；,；,5,、,、,尽,尽,快,快,送,送,检,检,；,；,6,、,、,多,多,数,数,菌,菌,可,可,冷,冷,藏,藏,送,送,检,检,，,，,但,但,不,不,耐,耐,寒,寒,冷,冷,的,的,脑,脑,膜,膜

15、,炎,炎,奈,奈,瑟,瑟,菌,菌,、,、,淋,淋,病,病,奈,奈,瑟,瑟,菌,菌,等,等,要,要,保,保,暖,暖,送,送,检,检,；,；,粪,粪,便,便,标,标,本,本,置,置,于,于,甘,甘,油,油,缓,缓,冲,冲,盐,盐,水,水,保,保,存,存,液,液,中,中,。,。,检,验,验,程,程,序,序,脓汁、脑脊液,血液,胸、腹水,粪便、呕吐物等,分离培养,纯培养,涂片染色,生化反应,血清学鉴定,药敏试验,动物实验,增菌培养,涂片染色,,谢,谢,谢,观,观,看,看,/,欢,迎,迎,下,下,载,载,BYFAITHIMEANAVISIONOFGOODONECHERISHESANDTHEENTHUSIASMTHATPUSHESONETOSEEKITSFULFILLMENTREGARDLESSOFOBSTACLES.BYFAITHIBYFAITH,