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1、Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,11/7/2009,,‹#›,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,,Company Logo,*,铁皮石斛,,组织培养,B1小组准备素材,,,第一页，共十五页。,铁皮石斛的组织培养,铁皮石斛，为兰科多年生附生草本植物。生于海拔达1600米的山地半阴湿的岩石上，喜温暖湿润气候和半阴半阳的环境，不耐寒。一般均能耐－5℃的低
2、温。石斛可分为黄草、金钗、马鞭等数十种，铁皮石斛为石斛之极品，它因表皮呈铁绿色而得名。,,Company Logo,第二页，共十五页。,,铁皮石斛的组织培养技术路线,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,外植体,丛生芽,培养基,生根发育,完整植株,,Company Logo,第三页，共十五页。,蔗糖：30g,,琼脂：6.8g,,,,,初代培养基的设计,,,,,,,,,诱导培养基,,MS+BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L,+,蔗糖3%,+琼脂6.8,%,【,pH值5.,2~5.6】,MS母液： I-V50ml,5ml,5ml,5ml 5m
3、l。,激素母液：BA10ml,NAA5ml,,,Company Logo,第四页，共十五页。,蔗糖：30g,琼脂：6.8g,土豆汁150ml,,,,继代培养基的设计,,,,,,,,,增殖培养基,,MS+BA0.5,ml,+NAA0.2+土豆汁10%~20%,【,pH值5.,2~5.6】,取MS母液： IV50ml,5ml,5ml,5ml,5ml;,激素母液：BA5ml,NAA2ml,,,Company Logo,第五页，共十五页。,NAA,BA,,,,,,,,,,,,IAA,增殖培养将建立的无菌系中的小苗转入增殖培养基中进行增殖培养。增殖培养基以MS为基本培养基，添加不
4、同浓度的生长调节剂BA、NAA、IAA、IBA及土豆汁和香蕉汁等附加物,。,,土豆汁,香蕉汁,IBA,,Company Logo,第六页，共十五页。,蔗糖：30g,琼脂：6.8g,香蕉汁：200ml,活性炭：20g,,,,生根培养基的设计,,,,,,,,,生根培养基,1/2MS+NAA0.2~0.5mg/L+香蕉汁20%+活性,炭2.0%【,pH值5.,2~5.6】,取MS母液： IV25ml,5ml,5ml,5ml,5ml;,激素母液：NAA2~5ml,,,Company Logo,第七页，共十五页。,,Your Text here,生根培养将,丛生芽无菌操作切下单
5、株,放在生根培养基中,于适宜条件下,培养，,约1~2周后即生根，,以长成完整植株,。,,Company Logo,第八页，共十五页。,,,,优选1,年生铁皮石斛植株,上,生长健壮的茎段,外植体的选择,接种小芽苗多易于在苗基部形成丛生芽,。,苗的高度为1～2cm时,丛生芽增殖倍数最高数,。,生长发育健壮苗优先,1,2,3,,Company Logo,第九页，共十五页。,外,植,体的处理,Text 1,Text 2,Text 3,,,,摘去叶片和膜质叶鞘，剪成约2cm长带节的小段,。,,用洗洁剂清洗后置流水下冲20~30,,min。,在超净工作台上用75%的酒精消30s0.1%HgCl2灭菌5mi
6、n后，用无菌水冲洗5~6次，放入垫有干无菌滤纸的培养皿中，以吸去多余水分，茎段两端各切0.2~0.3cm,。,,Company Logo,第十页，共十五页。,,,接种实验,一、接种准备工作,1、超净工作台开紫外灯照射10-20min送风,2、外植体消毒（继代培养采用已建立的无菌培养物作为材料）,3、工具消毒,二、接种操作,1、用消毒工具、器皿，切取铁皮石斛幼茎段2cm,2、接种环烧红，沾一下培养基,3、镊取茎段插于培养基中,4、封口、标记,,Company Logo,第十一页，共十五页。,各时期的培养条件,茎段的诱导时间在5~11天之间,培养温度23~25℃，光照强度2000lx，光照时间10
7、h/d,,Company Logo,第十二页，共十五页。,参考文献,[,1,]郑宽瑜,邓君浪,赵培快繁技术体系研究[J].云南农业科技,2009,(S2):57-59,。,[,2,]周根余,谢薇,程磊.影响铁皮石斛原球茎生长的若干因素[J].江西科学,1999,17(4):231-235.,[,3,]叶纪沟.铁皮石斛试管苗的人工栽培研究[J].中国药业,2001,10(1):53,。,[,4,]李铭宗.铁皮石斛的生物学特性和人工栽培[J].福建热作科技,1999,24(1):29-31,。,[,5,]张明,夏鸿西,朱利泉,等.石斛组织培养研究进展[J].中国中药杂志,2000,25(6):323-326,。,,,Company Logo,第十三页，共十五页。,B1小组成员展示结束,Thank You !,,,第十四页，共十五页。,内容总结,铁皮石斛 组织培养。MS+BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L+蔗糖3%+琼脂6.8%【pH值5.2~5.6】。MS+BA0.5ml+NAA0.2+土豆汁10%~20% 【pH值5.2~5.6】。1/2MS+NAA0.2~0.5mg/L+香蕉汁20%+活性炭2.0%【pH值5.2~5.6】。2、外植体消毒（继代培养采用已建立的无菌培养物作为材料）。1、用消毒工具、器皿，切取铁皮石斛幼茎段2cm,第十五页，共十五页。,
铁皮石斛组织培养
