临床微生物学和微生物学检验

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1、,,,,,,,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,,,*,抗菌药物敏感性试验,,南华大学预防医学与放射卫生实验教学中心,,,教学对象：高等医学院校卫生检验专业学生,实验课时：4学时,课程类型：专业实验课,课程要求：必修,每组人数：2人,,,实验目的和要求,掌握纸片扩散法（K－B法）的原理、操作方法等、结果判断、意义及质量控制；,熟悉肉汤稀释法抗生素敏感性试验的原理、操作方法、结果判断及意义等；,了解稀释法的质量控制。,,,实验内容,常用抗菌药物敏感性试验与耐药检测方法介绍。,纸片扩散法。,肉汤稀释法。,,,,一、常用抗菌药物敏感性试验与耐药检测方

2、法介绍,纸片扩散法（Kirby-Bauer test）,稀释法（dilution test）,E试验法（E test）,联合药物敏感试验,特殊耐药菌及耐药酶的表型检测,耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）的检测,β,-,内酰胺酶、超广谱β,-,内酰胺酶检测等,,,二、纸片扩散法（,K-B法,）,,原理：,含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上，纸片所含的药物吸取琼脂中的水分溶解后便不断向纸片周围区域扩散，形成递减的梯度浓度。在纸片周围抑菌浓度范围内的细菌生长被抑制，形成透明的抑菌圈。,抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与该药对测试菌的最低抑制浓度（minimal inhibit

3、ory concentration,，,MIC）呈负相关，即抑菌圈愈大，MIC愈小。,,,抑菌圈,,含药纸片,,,,方法：,菌液制备,：挑取孵育16-24h的血平板上数个菌落置于生理盐水管中，校正浓度至0.5麦氏标准；,涂布接种,：无菌棉拭蘸取菌液，在试管壁旋转挤去多余菌液后在MH琼脂表面均匀涂布接种3次，每次旋转平板60º，最后沿平板内缘涂抹1周；,贴含药纸片,：平板在室温下干燥3-5min，用无菌镊子将含药纸片紧贴于琼脂表面，各纸片中心相距应大于24mm，纸片距平板内缘应大于15mm；,孵育,：,35ºC 16-18h，量取抑菌圈直径。,,,结果判读：,用刻度尺量取抑菌圈直径，根据CLSI

4、（Clinical and Laboratory Standards Institute）标准判读结果；,报告：细菌对该抗生素是,敏感（susceptible，S）；,耐药（resistant，R）；,还是中介（intermediate，I）。,,,,,表1,金,金,黄,黄,色,色,葡,葡,萄,萄,球,球,菌,菌,抗,抗,菌,菌,药,药,物,物,敏,敏,感,感,性,性,试,试,验,验,评,评,价,价,结,结,果,果,,抗菌药物,纸片含药量,抑菌圈直径(mm),相应MIC值 (μg/ml),耐药,中介,敏感,耐药,敏感,,青霉素,10U,≤28,—,≥29,β-内酰胺酶,≤0.12,,苯唑西林,

5、1μg,≤10,11～12,≥13,≥4,≤2,,万古霉素,30μg,—,—,≥15,—,≤4,,庆大霉素,10μg,≤12,13～14,≥15,≥8,≤4,,红霉素,15μg,≤13,14～22,≥23,≥8,≤0.5,,克林霉素,2μg,≤14,15～20,≥21,≥4,≤0.5,,磺胺药,1.25/23.75μg,≤10,11～15,≥16,≥8/152,≤2/38,,,,三,、,、,肉,肉,汤,汤,稀,稀,释,释,法,法,原,理,理,：,：,以,水,水,解,解,酪,酪,蛋,蛋,白,白,（,（MH,）,）,液,液,体,体,培,培,养,养,基,基,将,将,抗,抗,生,生,素,素,做,做,不

6、,不,同,同,浓,浓,度,度,的,的,稀,稀,释,释,，,，,然,然,后,后,种,种,入,入,待,待,检,检,细,细,菌,菌,，,，,定,定,量,量,测,测,定,定,抗,抗,菌,菌,药,药,物,物,对,对,被,被,测,测,菌,菌,的,的,最,最,低,低,抑,抑,菌,菌,浓,浓,度,度,（,（MIC,）,）,或,或,最,最,低,低,杀,杀,菌,菌,浓,浓,度,度,（,（MBC,）,）,。,。,,,方,法,法,：,：,试,管,管,编,编,号,号：,取,取26,只,只,试,试,管,管,排,排,成,成,两,两,排,排,（,（,测,测,试,试,菌,菌,排,排,，,，,质,质,控,控,菌,菌,排,排,）,

7、）,每,每,排,排13,支,支,编,编,号,号,。,。,另,另,取,取3,支,支,试,试,管,管,，,，,分,分,别,别,标,标,记,记,上,上,“,“,肉,肉,汤,汤,对,对,照,照,”,”,、,、,“,“,测,测,试,试,菌,菌,生,生,长,长,对,对,照,照,”,”,和,和,“,“,质,质,控,控,菌,菌,生,生,长,长,对,对,照,照,”,”,等,等,对,对,照,照,。,。,抗,菌,菌,药,药,物,物,稀,稀,释,释：,用,用MH,肉,肉,汤,汤,倍,倍,比,比,稀,稀,释,释,抗,抗,菌,菌,药,药,物,物,至,至13,管,管,，,，,稀,稀,释,释,后,后,使,使,每,每,管,管,

8、含,含,抗,抗,菌,菌,药,药,物,物,稀,稀,释,释,液,液2ml,。,。,肉汤,对,对照,、,、测,试,试菌,生,生长,对,对照,、,、质,控,控菌,生,生长,对,对照,管,管：,分,分别,加,加入MH,肉,肉汤2ml。,,,方法,：,：,菌液,制,制备：生,理,理盐,水,水校,正,正测,试,试菌,和,和质,控,控菌,至,至0.5,麦,麦氏,比,比浊,标,标准,，,，再,用,用MH肉,汤,汤稀,释,释到10,7,CFU/ml,；,；,加菌,液,液：用,微,微量,加,加样,器,器取0.1ml稀,释,释菌,液,液由,低,低到,高,高加,于,于各,排,排试,管,管中,，,，其,最,最终,的,的接

9、,种,种量,为,为5,×,×10,5,CFU/ml,。,。测,试,试菌,排,排、,测,测试,菌,菌生,长,长对,照,照管,加,加测,试,试菌,液,液；,质,质控,菌,菌排,、,、质,控,控菌,生,生长,对,对照,管,管加,质,质控,菌,菌液,。,。,孵育：35,º,ºC24h,观,观察,结,结果,。,。,,,结果,：,：,测试,菌,菌（,或,或质,控,控菌,）,）不,出,出现,肉,肉眼,可,可见,生,生长,的,的最,低,低药,物,物浓,度,度为,该,该药,对,对测,试,试菌,（,（质,控,控菌,）,）的MIC。,,,,,注意,事,事项,：,：,培养,基,基、,接,接种,细,细菌,的,的菌,量,

10、量、,抗,抗菌,药,药物,纸,纸片,的,的质,量,量、,孵,孵育,温,温度,和,和观,察,察时,间,间、,操,操作,是,是否,规,规范,等,等均,能,能影,响,响本,试,试验,的,的结,果,果。,为保,证,证结,果,果的,可,可靠,性,性，,需,需同,时,时采,用,用相,应,应标,准,准菌,株,株同,时,时进,行,行药,敏,敏试,验,验作,为,为质,量,量控,制,制的,方,方式,。,。,,,,谢谢观,看,看,/,欢迎下,载,载,BYFAITHI MEANAVISIONOFGOODONECHERISHES ANDTHEENTHUSIASMTHAT PUSHESONETOSEEKITSFULFILLMENTREGARDLESSOFOBSTACLES. BY FAITH IBYFAITH,