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1、单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,.,*,器材准备,1,.,器材准备1.,自然界中的微生物,已经发现的微生物大约13万5千种，被认为非常危险的有600种，在人间传染的病原微生物380种。这些微生物存在于地球的各个角落，从寒冷的极地到炎热的赤道，从4.2千米地层深处到85千米高空（芽孢）,均有它们的踪迹。,空气、水、土壤、人体的体表以及与外界相通的腔道，均有不同种类和数量的微生物存在。,存在于人体消化道的,细菌,超过800种，数量可达100万亿（10,14,），菌体重量11.5公斤。,2,.,自然界中的微生物已经发现的微生物大约13万5千种，被认
2、为非常,医学微生物学实验综合性实验三,(P,38,),空气与人体体表细菌学检查,空气的细菌学检查P,38,手指皮肤的细菌学检查P,41,3,.,医学微生物学实验综合性实验三(P38)空气与人体体表细菌,空气的细菌学检查P,38,空气是人类赖以生存的环境之一，也是重要的疾病传播媒介。空气中的病原菌主要来自病人的排泄物和分泌物。这些污物，因风吹，以及人类日常活动，以气溶胶的形式悬浮于空中，使空气受到污染。,环境：不利于微生物生长。,种类：主要是病毒、真菌和细菌。在医院，公共场所致病菌的数量比较多。,作用：可迅速全球传播。,危害：引起培养基、生物制品的污染，病原菌引起呼吸道传染病。,4,.,空气的细
3、菌学检查P38 空气是人类赖以生,实验方法：自然沉降法是根据空气中细菌气溶胶粒子，在地心引力的作用下，以垂直的自然方式沉降到培养基表面；培养以后，计数菌落形成单位（colony forming unit，CFU），了解空气的污染情况。,实验步骤：每组1块平板，选择采样地点（实验室、宿舍、卫生间、饭堂或任选地点），将平板盖打开，盖朝下放置在平板旁，平板暴露于空气中15分钟，然后盖上盖子，作标记。37温箱培养24小时，观察结果。,CFU/m,3,50000N,AT86N(直径7cm平板）。,N：平板上的菌落数。A：平板面积(平方厘米)。,T：采样时间(分钟)。,5,.,实验方法：自然沉降法是根据空
4、气中细菌气溶胶粒子，在地心引力的,空气的细菌学检查,组号,地点,时间(min),菌落形成单位(CFU),1,卫生间,15,2,食堂,15,3,门诊大厅,15,4,呼吸科病房,15,5,呼吸科ICU,15,6,外科病房,15,7,外科ICU,15,8,外科治疗室,15,9,婴儿室,15,10,实验室,15,6,.,空气的细菌学检查组号地点时间(min)菌落形成单位(CFU),手指皮肤的细菌学检查P,41,在日常生活中，手的接触范围广，使用频率高，受到污染的机会也最多。一只外观比较“干净”的手，可携带10万个细菌、200多种病毒。因此，经手传播的疾病很多，范围很广，包括肠道传染病、部分呼吸道传染病
5、、皮肤传染病，以及一切可经手间接传播的疾病。,常住菌：,存在于皮肤表面、毛囊和皮脂腺。种类和数量比较恒定。附着在皮肤上比较牢固，用一般洗手方法，常不易去除。,暂住菌：,存在于皮肤表面经常暴露的部位。暂住菌是外来的非正常菌群，种类和数量不定。引起人类致病的通常是暂住菌。,7,.,手指皮肤的细菌学检查P41 在日常生活中，,医务人员，经常要与病人接触，不管是直接接触，还是间接接触，都有传播病菌的可能。虽然病菌的直接来源是患者,但是造成病菌扩散的主要途径则是气溶胶和医务人员的手。因此，经常洗手和消毒是控制医院内交叉感染的主要方法。,实际上，预防感染措施中，最简单又十分有效的方法就是洗手。据测定，只用
6、自来水洗手可使,暂住菌,总数减少40%，用肥皂洗手可减少80%以上。,洗手？,8,.,医务人员，经常要与病人接触，不管是直接接触，还是间接接触，都,常规的洗手方法,（甲和丙操作）,将手充分浸湿，涂抹肥皂或洗涤液。,反复搓揉双手，搓揉时间不应少于 30秒。,用流水冲洗干净，整个洗手过程不少于1分钟。,能有效地去除大多数手上的暂住菌。,9,.,常规的洗手方法（甲和丙操作）将手充分浸湿，涂抹肥皂或洗涤液。,医学微生物学实验室,标准洗手方法,（乙和丁操作）,用流动的水冲洗，将手充分浸湿，涂抹肥皂、洗涤液。,分别搓擦1015次。,保持双手低于肘部，,流水冲洗一分钟以上。,1.掌心对掌心搓擦 2.手指交错
7、掌心对手背搓擦 3.手指交错掌心对掌心搓擦,4.两手互握互搓指背 5.拇指在掌中转动搓擦 6.指尖在掌心中搓擦,10,.,医学微生物学实验室标准洗手方法（乙和丁操作）用流动的水冲洗，,1.掌心对掌心搓擦 2.手指交错掌心对手背搓擦 3.手指交错掌心对掌心搓擦,4.两手互握互搓指背 5.拇指在掌中转动搓擦 6.指尖在掌心中搓擦,11,.,1.掌心对掌心搓擦 2.手指交错,医务人员洗手指征,接触传染病患者之后。,接触携带多耐药性细菌的病人之后。,接触病人的血液、体液、分泌物和排泄物之后。,接触高危病室两个病人之间、新生儿室两个新生儿之间。,接触旧钱币之后。,上厕所,前,后。,进行微生物操作或作血、
8、尿等生化、免疫测定之后。,在施行各种手术前后。,诊断、治疗、护理特别易感染的病人之前。,进食之前。,12,.,医务人员洗手指征接触传染病患者之后。12.,1,3,2,4,1,3,2,4,手指皮肤的细菌学检查,第1格为洗手前，,第2格为洗手后，,第3格为消毒后，,第4格空白对照。,2人1块平板,上:甲、丙常规洗手,下:乙、丁标准洗手,甲（丙）,乙（丁）,丙,丁,13,.,1 3 2 4 1 3 2 4 手指皮肤的细菌学检查第,医学微生物学实验综合性实验一,(P,2,),脓汁和粪便标本中病原菌的检测（二）,临床标本的检查程序,细菌的分离与培养P,7,目的要求：掌握分离、纯化微生物的基本操作技术。,
9、14,.,医学微生物学实验综合性实验一(P2)脓汁和粪便标本中病原菌,常见病原性球菌的检查程序P47：,直接涂片、革兰染色、镜检,脓汁、痰、咽部分泌物 观察菌落性状、溶血性、色素,血琼脂平板培养 涂片染色镜检,挑取可疑菌落 生化反应,纯培养 动物实验,药敏实验,血液、穿刺液 肉汤增菌培养 培养液涂片染色境检,常见肠道致病菌的检查程序P48：,粪便 SS琼脂、伊红美蓝平板培养 挑取可疑菌落,血清学鉴定,血、骨髓 增菌培养 双糖铁培养基 染色镜检,生化反应,15,.,常见病原性球菌的检查程序P47：15.,平板划线分离法：,借助于划线，将混杂的,多种,细菌，在固体培养基表面分散成,单个,细菌，并固
10、定在某一点上。培养以后细菌各自分裂繁殖，形成肉眼可见的细菌集团。,在固体培养基表面或基内，由单个细菌在局部位置不断增值的稠密群体称为,单菌落,。,在固体培养基表面，由多个菌落融合在一起形成的细菌堆积物,称为,菌苔,。,16,.,平板划线分离法：16.,平板分区划线分离法步骤（5区）,接种环烧灼灭菌，以免污染标本。,取标本在平板表面上方密集涂布510mm,2,。,烧掉接种环上多余的标本（火焰背面烤干烧灼）。,晃动平板，当看到平板表面象镜面有反光的时候，保持这个角度，划线时就能看清划线痕迹，以便控制划线。,接种环与平板呈3040度角，通过密集涂布部分13次，使接种环重新沾上少量标本(细菌)，然后在
11、平板表面，以曲线的形式，作大幅度来回连续划线，边划边退，线段要划得长而密集，每区划线不少于30条。,转动平板，接种环通过第一区1次，同样的方法划第二区。如此依次划完3,5区。,接种环烧灼灭菌,（火焰背面烤干烧灼）,，以免污染环境。,将平板倒置（盖在下，底朝上），37,培养1824h,。,要充分利用平板面积，5区间隔尽量小，不能划破琼脂。,17,.,平板分区划线分离法步骤（5区）17.,510mm,2,30条线,平板划线不少于150条线,18,.,510mm2 30条线平板划线不少于150条线18.,平板划线分离法P,8,甲脓汁标本普通平板（黄色）,乙脓汁标本普通平板,丙粪便标本伊红美蓝（紫色）
12、,丁粪便标本伊红美蓝,19,.,平板划线分离法P819.,实验分组,俩俩相对,4人为,一组,组号编在电源插座上。,每组按从前到后,从左到右的顺序，分别编号为甲、乙、丙、丁。,甲 乙,4,丙 丁,甲 乙,3,丙 丁,甲 乙,2,丙 丁,甲 乙,1,丙 丁,甲 乙,5,丙 丁,甲 乙,8,丙 丁,甲 乙,7,丙 丁,甲 乙,6,丙 丁,甲 乙,10,丙 丁,甲 乙,9,丙 丁,讲,台,20,.,实验分组俩俩相对4人为一组,组号编在电源插座上。甲,接种环烧灼灭菌,使用前，直接在酒精灯上烧灼灭菌，把环和金属丝烧红即可。,使用后，先在火焰,背面将,把环上标本烤干，再烧灼灭菌，以免标本汽化，爆烈四溅，污染
13、环境。,金属杆快速通过火焰2,3次，杀灭表面微生物,21,.,接种环烧灼灭菌使用前，直接在酒精灯上烧灼灭菌，把环和金属丝烧,接种环直径3mm,环面,垂直,离开液面：快速3ul,慢速1ul。,环面,水平,离开液面：快速6ul,慢速2ul。,22,.,接种环直径3mm环面垂直离开液面：快速3ul,慢速1ul。环,23,.,23.,24,.,24.,接种环与平板接触点和划线方法？,25,.,接种环与平板接触点和划线方法？25.,26,.,26.,510mm,2,30条线,平板划线不少于150条线,27,.,510mm2 30条线平板划线不少于150条线27.,37培养24小时,28,.,37培养24
14、小时 28.,37培养24小时,29,.,37培养24小时 29.,37培养24小时,30,.,37培养24小时 30.,37培养24小时,31,.,37培养24小时 31.,安全警告,接种环接种平板一次，可产生几十个微生物气溶胶颗粒。,气溶胶粒径100um沉降很快，50um在0.4s内扩散开，5um通过呼吸道直接到达肺泡。,Pike博士对实验室感染统计分析结果发现，不明原因的感染高达82%，大多数是气溶胶在空气中扩散引起的。,实验时应坐着，,在酒精灯半径20厘米范围内操作，,保持安静、有序，尽量少说话、少走动，,以免感染病原菌,。,32,.,安全警告接种环接种平板一次，可产生几十个微生物气溶
15、胶颗粒。3,思考题,为何取链球菌作为空气的卫生指标之一?,为什么金黄色葡萄球菌是医院内感染常见的重要病原菌?,为什么接种环使用前后必须烧灼灭菌？忽略了有什么危害?,做细菌培养时，平板为什么要倒置?,培养细菌的常用方法有哪些?,从临床标本中分离病原菌，应注意哪些事项?,33,.,思考题为何取链球菌作为空气的卫生指标之一?33.,实验内容,空气的细菌学检查P,38,普通平板(1组1块）,手指皮肤的细菌学检查P,41,普通平板(2人1块 划分8格）,平板划线分离法P,8,甲，乙脓汁标本普通平板(黄色，1人1块）,丙，丁粪便标本伊红美蓝(紫色，1人1块）,34,.,实验内容空气的细菌学检查P3834.,常用器材摆放顺序：电源插座试管架酒精灯污物盘。,试管架上器材：按接种针、接种环、油性笔和打火机的顺序，分别放置在试管架中间两行，靠近电源插座一侧。,器材使用以后，必须放回原处，依次摆整齐。,35,.,常用器材摆放顺序：电源插座试管架酒精灯污物盘。35.,酒精棉球,碘酒棉球,镊子,电炉、石棉网,手套,微生物学公共器材柜-2,（东侧边台中段）,36,.,酒精棉球碘酒棉球镊子电炉、石棉网手套微生物学公共器材柜-23,实验室器材 整齐有序,37,.,实验室器材 整齐有序37.,
经典ppt课件：医学微生物学实验脓汁和粪便标本中病原菌的检测
