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1、单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,28/10/2006,第四届中国肿瘤学术大会 蔡国响,第 页,22/05/2010,第六届中国肿瘤学术大会 蔡国响,局部进展期散发性结直肠癌,CpG,岛甲基子表型,和预后的关系,蔡国响 博士,复旦大学附属肿瘤医院 大肠外科,复旦大学大肠癌诊治中心,第六届中国肿瘤学术大会上海,2010,1,22/05/2010第六届中国肿瘤学术大会 蔡国响局部进展,结直肠癌发病率居上海市区恶性肿瘤第二位。,30,40,结直肠癌患者最终死于复发转移。,TNM,分期是目前预测复发转移、指导辅助治疗的最佳依据。,美国,SEER,数据显示：部分,TNM
2、,期别和预后之间缺乏相关性（,A,期结直肠癌生存率反而高于,B,期）。,在,TNM,分期基础上，发现和应用新的分子生物学指标提高预后判断准确性是目前肿瘤研究热点。然而，迄今尚未找到公认的具有临床应用价值的预后分子指标。,研究背景,22/05/2010,第六届中国肿瘤学术大会 蔡国响,2,结直肠癌发病率居上海市区恶性肿瘤第二位。研究背景22/05/,22/05/2010,第六届中国肿瘤学术大会 蔡国响,研究背景,表遗传学,遗传学,非,DNA,序列变化引起的,可遗传的基因表达改变,全基因组低甲基化,癌基因异常甲基化,抑癌基因过度甲基化,组蛋白异常修饰,3,22/05/2010第六届中国肿瘤学术大会
3、 蔡国响研究背景,22/05/2010,第六届中国肿瘤学术大会 蔡国响,研究背景,4,抑癌基因启动子甲基化导致基因失表达,22/05/2010第六届中国肿瘤学术大会 蔡国响研究背景,22/05/2010,第六届中国肿瘤学术大会 蔡国响,研究背景,正常大肠粘膜,大肠癌组织,基因启动子,CpG,岛非甲基化,基因启动子,CpG,岛甲基化,大肠癌相关肿瘤特异性甲基化位点：,p14,、,hMLH1,、,p16,、,MGMT,、,MINT1,5,22/05/2010第六届中国肿瘤学术大会 蔡国响研究背景,22/05/2010,第六届中国肿瘤学术大会 蔡国响,研究背景,CpG,岛甲基子表型（,CIMP,）被
4、认为是继染色体不稳定（,CIN,）和微卫星不稳定（,MSI,）之后发现的第三种基因组不稳定机制。,CIMP,反映多个抑癌基因的同时过度甲基化状态。,CIMP,（）判断标准：同时甲基化位点的数目达到,2/3,、,3/5,、,3/6,或,3/7,等及其以上。,结直肠癌,CIMP,的预后意义相关研究较少，存在一定的争议。,文献中未见同时研究三种基因组不稳定机制（,CIMP,、,CIN,和,MSI,）的预后价值的研究。,6,22/05/2010第六届中国肿瘤学术大会 蔡国响研究背景,探讨,各种临床病理以及分子生物学指标和,/,期散发性结直肠癌预后的关系。,探讨结直肠癌多基因甲基化的预后意义。,22/0
5、5/2010,第六届中国肿瘤学术大会 蔡国响,研究目标,7,探讨各种临床病理以及分子生物学指标和/期散发性结直肠癌预,22/05/2010,第六届中国肿瘤学术大会 蔡国响,研究对象,2004,年,7,月,11,月接受根治性手术切除的,50,例,/,期,散发性大肠癌患者的原发病灶,初治患者,明确的术后病理诊断,术前未行放化疗,无任何肿瘤家族史,术后半小时内新鲜取材,8,22/05/2010第六届中国肿瘤学术大会 蔡国响研究对象,22/05/2010,第六届中国肿瘤学术大会 蔡国响,研究方法免疫组化检测（,IHC,）,检测指标：,k-ras,、,APC,、,p53,、,BAX,、,TGFR,IHC
6、,结果的判断标准,肿瘤细胞胞浆（,k-ras,、,APC,、,Bax,、,TGFR,）,或胞核（,p53,）染色阳性者所占比例,10,为阳性,腺癌，癌组织,APC,阳性表达，定位于细胞浆,9,22/05/2010第六届中国肿瘤学术大会 蔡国响研究方法,22/05/2010,第六届中国肿瘤学术大会 蔡国响,研究方法流式细胞仪检测（,FCM,）,倍体分析的判断标准,DNA,指数（,DI,）肿瘤细胞的,G0/1,峰均道值,/,正常细胞的,G0/1,峰均道值,二倍体（,DI,1,）和异倍体（,DI1,）,异倍体者定义为,CIN,（）,二倍体,异倍体,10,22/05/2010第六届中国肿瘤学术大会 蔡
7、国响研究方法,22/05/2010,第六届中国肿瘤学术大会 蔡国响,检测位点：,BAT25,、,BAT26,MSI,的判断标准,微卫星位点阴性：主峰（单一峰型）,微卫星位点阳性：主峰新生峰,MSI,（）：,2,个位点中任意一个出现阳性结果,MSI,（）,MSI,（）,研究方法 微卫星不稳定（,MSI,）检测,11,22/05/2010第六届中国肿瘤学术大会 蔡国响检测位点,22/05/2010,第六届中国肿瘤学术大会 蔡国响,研究方法,甲基化特异性,PCR,（,MSP,）,检测位点：,p14,、,hMLH1,、,p16,、,MGMT,和,MINT1,MSP,反应结果的判断标准,未甲基化：,PC
8、R,产物电泳时只出现未甲基化条带,甲基化：,PCR,产物电泳时出现甲基化条带，无论是否出现未甲基化条带,CIMP,（）：,3/5,个位点同时出现甲基化条带,12,22/05/2010第六届中国肿瘤学术大会 蔡国响研究方法,22/05/2010,第六届中国肿瘤学术大会 蔡国响,SPSS11.5,软件,生存分析：,寿命表法：计算无疾病生存（,DFS,）,单因素分析：,Kaplan-Meier法,多因素分析：,Cox回归法,检验标准：,P,0.05,统计学分析,13,22/05/2010第六届中国肿瘤学术大会 蔡国响SPSS,22/05/2010,第六届中国肿瘤学术大会 蔡国响,性别：男性,23,例
9、，女性,27,例。,年龄：平均,54.54 11.76,岁（,22-80,岁）。,部位：结肠癌,18,例，直肠癌,32,例。,肿瘤最大径：平均,5.24 2.53 cm,（,2-16cm,）。,组织类型：腺癌,39,例，粘液腺癌,11,例。,分化程度：高中分化,36,例，低分化,14,例。,脉管或神经侵犯：脉管侵犯（,+,）,6,例，神经侵犯（,+,）,4,例。,TNM,分期：,A,期,11,例，,B,期,7,例，,期,32,例。,14,研究结果临床病理信息,22/05/2010第六届中国肿瘤学术大会 蔡国响性别：男,22/05/2010,第六届中国肿瘤学术大会 蔡国响,辅助化疗：,36,例患
10、者接受含,5Fu,方案的静脉化疗,3,月以上,随访时间：全部病例随访超过,3,年，平均随访时间,47.64 17.68,月。,生存情况：死亡,13,例。,5,年总生存率,62,。,复发转移：局部复发,3,例，远处转移,19,例，复发或转移,20,例（其中,2,例为远处转移同时合并局部复发）。,5,年无疾病生存率（,DFS,）,58,。,15,研究结果随访情况,22/05/2010第六届中国肿瘤学术大会 蔡国响辅助化疗,22/05/2010,第六届中国肿瘤学术大会 蔡国响,肿瘤抗原检测,：,CEA,异常升高者,9,例（,10,ug/l,），,CA19.9,异常升高者,10,例（,37 U/ml,
11、）,IHC,检测：,蛋白表达阳性者：,k-ras,（,21,例）、,APC,（,20,例）、,p53,（,21,例）、,BAX,（,34,例）、,TGFR,（,29,例）,倍体分析：,二倍体,16,例，异倍体,33,例，,1,例因,CV,值大于,8,从分析中剔除。,MSI,检测：,MSI,（）者,6,例（,12,）,MSP,检测：,单一基因高甲基化者：,hMLH1,（,7,例）,MGMT,（,14,例）,p16,（,13,例）,p14,（,15,例）,MINT1,（,27,例）。,CIMP,（）者,12,例（,24,）。,16,研究结果分子生物学检测,22/05/2010第六届中国肿瘤学术大会
12、 蔡国响肿瘤抗原,指标,p,值,Kaplan-Meier,Cox Regression,年龄,（,60,岁，,60,岁）,0.815,/,性别,（男，女）,0.990,/,部位,（结肠，直肠）,0.111,/,肿瘤最大径,(,3.0cm,3.0cm),0.620,/,组织类型（腺癌，粘液腺癌）,0.671,分化程度（高中分化，低分化）,0.681,/,脉管侵犯,(,阳性，阴性,),0.128,/,神经侵犯（阳性，阴性）,0.723,/,TNM,分期（,期，,期）,0.049,0.175,辅助化疗（是，否）,0.781,/,22/05/2010,第六届中国肿瘤学术大会 蔡国响,研究结果,DFS,
13、生存分析（临床病理指标）,17,p 值Kaplan-MeierCox Regression年,指标,P,值,Kaplan-Meier,Cox Regression,CEA,（正常，异常）,0.304,/,CA19.9,（正常，异常）,0.141,/,IHC-kras,(,阳性，阴性,),0.657,/,IHC-APC,(,阳性，阴性,),0.596,/,IHC-p53,(,阳性，阴性,),0.700,/,IHC-BAX,(,阳性，阴性,),0.577,/,IHC-TGF,R,(,阳性，阴性,),0.434,/,倍体（异倍体，二倍体）,0.997,/,MSI,（阳性，阴性）,0.988,/,22
14、/05/2010,第六届中国肿瘤学术大会 蔡国响,研究结果,DFS,生存分析（分子生物学指标）,18,P 值Kaplan-MeierCox RegressionC,指标,P,值,Kaplan-Meier,Cox Regression,MSP-hMLH1,（阳性，阴性）,0.691,/,MSP-MGMT,（阳性，阴性）,0.885,/,MSP-p16,（阳性，阴性）,0.027,/,MSP-p14,（阳性，阴性）,0.422,/,MSP-MINT1,（阳性，阴性）,0.356,/,CIMP,0.014,0.019,HR,（,95,CI,）：,2.935,（,1.193-7.220,）,22/05
15、/2010,第六届中国肿瘤学术大会 蔡国响,研究结果,DFS,生存分析（分子生物学指标）,19,P值Kaplan-MeierCox RegressionMS,/,期散发性结直肠癌无疾病生存分析（,Kaplan-Meier,法）,22/05/2010,第六届中国肿瘤学术大会 蔡国响,5y-DFS 66,5y-DFS 30,研究结果,DFS,生存分析（,CIMP,）,20,/期散发性结直肠癌无疾病生存分析（Kaplan-Meie,22/05/2010,第六届中国肿瘤学术大会 蔡国响,讨论,CIMP,和结直肠癌预后的关系,文献中关于,CIMP,和结直肠癌预后的关系存在一定的争议。,多数研究,显示,C
16、IMP阳性提示预后不良,，和本研究结果一致。,J Clin Oncol,（,2003,）,21:37293736,Clin Cancer Res,（,2007,）,13:60936098,Cancer Res,（,2008,）,68:8541-8546,少数研究显示,CIMP阳性,者预后较好。,Gut,（,2009,）,58:9096,个别研究认为,CIMP没有预后价值。,Virchows Arch(2009)455:485494,研究结果存在差异的可能原因：,甲基化基因,panel,不同。,CIMP,判断标准不同。,实验方法不同：,MSP,、,MethyLight,、,Pyrosequencing,。,21,22/05/2010第六届中国肿瘤学术大会 蔡国响讨论C,22/05/2010,第六届中国肿瘤学术大会 蔡国响,讨论,-,单基因高甲基化和结直肠癌预后的关系,本研究显示在,CIMP,的,5,个,panel,基因中，,p16,基因的高甲基化可能在结直肠癌的复发转移机制中扮演重要角色。,p16,是重要的细胞周期调控基因，其编码产物可与,Cyclin D,竞争结合,CDK4/6,，抑制
局部进展期散发性结直肠癌CpG岛甲基子表型和预后的关系课件
