致畸胎试验

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1、 致畸胎试验 致畸胎试验2.3.10.1 目的 检测消毒剂对妊娠实验动物有无致畸胎性，确定其未观察到发育毒性的剂量。2.3.10.2 试剂 （1)1/1000 茜素红溶液:茜素红 0.1g，氢氧化钾 10g，加蒸馏水 1000m1。（2)透明液 A:甘油 200ml，氢氧化钾 10g，蒸馏水 790ml。（3)透明液 B:甘油与蒸馏水等量混合。（4)固定液(Bouins 液):苦味酸饱和液 75 份，甲醛 20 份，冰醋酸 5 份。2.3.10.3 实验动物 试验用大鼠或小鼠(必要时可用家兔)。用大鼠和小鼠试验时，取健康、性成熟、未交配过的体重为 200g250g 的大鼠，或体重为25g30g

2、 的小鼠。2.3.10.4 试验分组 至少设 4 组，其中 3 个为试验组，1 个为阴性对照组。每组至少有 15 只孕鼠。高剂量组可用雌鼠的 1/10LD50作为试验剂量；低剂量组，可用雌性动物的 1/100LD50作为试验剂量。其间设中剂量组。阴性对照组以受试物的溶剂代替受试物进行试验。阳性对照组常用阿司匹林(300mg/kg 体重)、敌枯双(1mg/kg 体重)或维生素A(40000IU)。对于实验室首次进行的种或品系必需设阳性对照组。为了保证试验方法的可靠性，每隔半年需用阳性对照物检查一次。2.3.10.5 操作程序 （1）将雌鼠和雄鼠按 1:1 或 2:1 的比例同笼饲养。每日晨观察阴

3、栓(或阴道涂片)。查出阴栓或精子的当天定为孕期零天。如 5d内未交配，调换雌鼠。查出的孕鼠按上述随机分组，并进行称重和编号。（2）在大、小鼠孕期 6d15d 期间，每天用灌胃法给予受试物。分别于孕期 0d、6d、10d、15d 和 20d 称重孕鼠，并根据体重调整受试物给予量。注意观察并记录孕鼠的毒性反应。（3）大鼠于孕期第 20d，小鼠于孕期第 18d，用颈椎脱臼法处死。剖腹，取出子宫称重，检查活胎、吸收胎、早期死胎和晚期死胎数。（4)逐个记录活胎鼠的性别、体重、身长和尾长。外观检查头面部、躯干部、四肢等有无畸形，诸如皮下出血、露脑、脑膨出、眼部畸形(无眼或开眼等)、鼻孔扩大、单鼻孔、唇裂、

4、脊柱裂、四肢和尾畸形、肛门闭锁等。（5）每窝取约 1/22/3 活胎鼠，用眼科镊剥皮。取出内脏(注意勿拉断肋骨)，去掉后颈和两肩胛骨之间的脂肪块。将胎鼠放入茜素红溶液染色。当天摇动玻璃瓶 2 次3 次。待骨骼染成红色时为止。将胎鼠换入透明液 A 中 1d2d，换入透明液 B 中 2d3d。待胎鼠骨骼已染红，而软组织的紫红色基本褪去，可换置甘油中。（6)将染好的标本连同甘油一并倒入含水平皿内，在解剖显微镜下，用透射光源，先观察胎鼠全身，然后逐步检查:头骨、胸骨、脊椎骨、肋骨和四肢等有无骨化不全、骨化迟缓和其他缺陷。观察脊椎骨有无缺失、融合、纵裂等畸形；观察胸骨的发育和数目，有无胸骨缺失等；检查肋

5、骨有无融合肋、分叉肋、肋骨中断、缺肋、短肋、波状肋、多肋畸形等；最后检查四肢骨畸形。（7)每窝取约 1/31/2 活胎鼠浸入固定液 2 周，作内脏检查。将已固定的胎鼠用水冲净，仰放于石蜡板上。剪去四肢和尾，用刀片在头颈部常规共切 4 刀，再用剪刀剖开胸、腹腔。着重检查:有无裂舌、双叉舌、裂腭及眼、鼻和脑部的畸形；是否出现右位心、心脏过大、肺过大或过小等畸形；消化系统和泌尿生殖系统各器官的大小、形状以及位置；有无肾盂积水，双侧有无睾丸，以及子宫发育不全等畸形。2.3.10.6 评价规定 主要观察动物畸胎出现率，同时观察其他指标，如着床数、活胎数、晚期死胎数、早期死亡数，以及活胎体重、身长、尾长等。观察全部结果的剂量-反应关系，确定受试物的母体毒性、发育毒性及致畸性。求出受试物的最小致畸剂量和最大无致畸作用剂量。对致畸强度应以致畸指数表示。致畸指数=(雌鼠 LD50)/(最小致畸剂量)致畸指数小于或等于 10 为基本不致畸；大于 10 至 100 为致畸；大于100 为强致畸。