急性经口毒性试验

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1、急性经口毒性试验急性经口毒性试验2.3.1.1 目的 （1)检测消毒剂对实验动物的急性毒性作用和强度。（2)为亚急（慢）性毒性等试验提供剂量选择的依据。2.3.1.2 实验动物 小鼠或大鼠任选一种，雌雄各半。小鼠体重 18g22g，大鼠体重 180g220g，根据不同的计算 LD50方法，选用适当的动物数量。2.3.1.3 试验分组 如应用概率单位-对数图解法计算 LD50，随机分为 5 个6 个剂量组。通常最高剂量组的动物死亡率应90%，最低剂量组动物死亡率应10%。可先以较大的组距较少量动物进行预试，找出其粗略致死剂量范围，然后再设计正式试验的剂量分组。2.3.1.4 操作程序 （1）动物

2、的准备：试验前，一般禁食过夜，不限制饮水。（2）受试物的配制：常以水或食用植物油为溶剂配制成溶液，或采用 0.5%羧甲基纤维素配制成混悬液。灌胃给予受试物的最大容量，小鼠不超过 0.2ml/10g 体重，大鼠不超过 1.0ml/100g 体重。（3）染毒方法：用灌胃方式将受试物一次给予动物。若受试物毒性很低，一次灌胃容量太大，可在 24h 内分成 2 次3 次给予，其总剂量作为一日剂量计算。（4）染毒后观察动物的中毒表现和死亡数及死亡时间，并对死亡动物和观察期满处死动物进行尸体解剖，肉眼观察，发现有异常的组织或脏器，尚需进一步作组织病理学检查。观察时间 14d。2.3.1.5 LD50 的计算

3、方法 根据给受试物后 14d 内的各剂量组动物死亡率计算 LD50(半数致死剂量)。2.3.1.5.1 概率单位-对数图解法：（1）根据各剂量组动物死亡率，从表 2-9 中查各组的概率单位。因死亡率为 0%和 100%的概率单位，与所试动物数有关，故需另在表2-10 中查找。例如：对死亡率为 45%的概率单位，可查表 2-9。先在表的左侧纵标目上找到 40，而后在表的上行横标目处找到 5，两者交叉点处的 4.87，即为 45%的概率单位。又如:某组用 10 只实验动物，如果全部存活(死亡率为 0%)，查表 2-10，其概率单位为 3.04。表 2-9 百分率-概率单位换算表%0 1 2 3 4

4、 5 6 7 8 9 0 .2.67 2.95 3.12 3.25 3.36 3.45 3.52 3.59 3.66 10 3.72 3.77 3.82 3.87 3.92 3.96 4.01 4.05 4.08 4.12 20 4.16 4.19 4.23 4.26 4.29 4.33 4.36 4.39 4.42 4.45 30 4.48 4.50 4.53 4.56 4.59 4.61 4.64 4.67 4.69 4.72 40 4.75 4.77 4.80 4.82 4.85 4.87 4.90 4.92 4.95 4.97 50 5.00 5.03 5.05 5.08 5.10 5

5、.13 5.15 5.18 5.20 5.23 60 5.25 2.28 5.31 5.33 5.36 5.39 5.41 5.44 5.47 5.50 70 5.52 5.55 5.58 5.61 5.64 5.67 5.71 5.74 5.77 5.81 80 5.84 5.88 5.92 5.95 5.99 6.04 6.08 6.13 6.18 6.23 90 6.28 6.34 6.41 6.48 6.55 6.64 6.75 6.88 7.05 7.33 注:横标目数字为死亡率的个位数，纵标目数字为死亡率的十位数。表 2-10 相应于反应率为 0及 100的概率单位 该组动物数 反

6、应率 该组动物数 反应率 0%100%0%100%.11 3.00 7.00 2 3.85 6.15 12 2.97 7.03 3 3.62 6.38 13 2.93,7.07 4 3.47 6.53 14 2.90 7.10 5 3.36 6.64 15 2.87 7.13 6 3.27 6.73 16 2.85 7.15 7 3.20 6.80 17 2.82 7.18 8 3.13 6.87 18 2.80 7.20 9 3.09 6.91 19 2.78 7.22 10 3.04 6.96 20 2.76 7.24 （2)用方格纸绘散点图，横轴表示剂量的对数值(X)，纵轴为概率单位值(

7、Y)，将各组数值点在图上。（3)按各点的分布趋势，用直尺绘出一条最适合于各点的直线，使线上方的点到线的总距离与线下方的点到线的总距离相近，此线应尽量靠近概率单位为 5 的点及附近的点。（4）查出求概率单位 5 处的剂量对数，其反对数即为 LD50。按下列公式计算 LD50 的 95%可信限。S=(X2 X1)/(Y2 Y1)Sm=S/(N/2)-1/2 LD50 对数值的 95%可信限=log LD50 1.96Sm (上式结果，经反对数变换后，可得 LD50 的 95%可信限)Sm 为 LD50的标准误；S 为标准差；X1、X2 分别为机率单位等于 4(Y1)和 6(Y2)时相应的剂量对数值

8、；N为 Y1(=4)及 Y2(=6)相应的死亡率间所用的动物数。2.3.1.5.2 一次最大限度试验：如 20 只动物(雌雄各半)一次灌胃剂量 5000mg/kg 体重，在14d 内又无死亡，可判定 LD50大于 5000mg/kg 体重。2.3.1.5.3 其他方法：如霍恩(Horn)法、寇氏(Karber)法等。2.3.1.6 评价规定 消毒剂的毒性评价：LD50大于 5000mg/kg 体重者属实际无毒；LD50为 501mg/kg5000mg/kg 体重者属低毒；LD50为 51mg/kg500mg/kg 体重者属中等毒；LD50为 1mg/kg50mg/kg 体重者属高毒；LD50小于 1mg/kg 体重者属剧毒。注：为评价消毒剂在实际应用时对人体的安全性，当产品原形LD505000mg/kg 体重时，需增做消毒剂最高应用液浓度 5 倍溶液的急性经口毒性试验，并计算其 LD50。