[doc格式] 金胺“O”荧光染色法在结核病细菌学检验中的应用

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1、金胺“O”荧光染色法在结核病细菌学检验中的应用 中国卫生检验杂志2008年5月第l8卷第5期ChineseJournalofHealthLaboratoryTechnology,May2008;Vol18No5851 【微生物检测方法】 金胺”0”荧光染色法在结核病细菌学检验中的应用 戴学海,金法祥,汤佳良,许鹏 (浙江省绍兴市第六人民医院,浙江绍兴312000) [摘要]目的:比较两种抗酸杆菌染色方法的差异.方法:采用金胺”0”荧光染色法和萋一尼染色法同时对同一病人标 本进行检测.结果:经过240例标本对比实验,荧光染色组84例阳性,其阳性率为35.O%,萋一尼染色组7O例

2、,阳性率 为29.2%,经检验,X2=1.88,P>0.05,无显着性差异.在两组结果1+的阳性对比中,荧光染色组为15.8%,而抗酸 染色组为9.6%,经检验=5.56,P<0.05,两种方法有差异;而2+,3+,4+的阳性率P值均大于0.05,无显着性差 异.结论:金胺”0”荧光染色组检出率明显高于萋一尼染色组,尤其是痰液标本菌量是1+,对那些病变轻,排菌量少的肺 结核病人的诊断具有重要意义.荧光染色镜检时间短,工作效率高,适用于大量标本的检测. [关键词]荧光染色;抗酸染色;抗酸杆菌 [中图分类号]R446[文献标识码]A[文章编号]1004—8685(2008)

3、05—0851—02 ApplicationoffluorescencestainofauramineOtoinspectionoftuberculosisbacteriology DaiXue—hai,JinFa—xiang,TangJia—liang,XuPeng (ShaoxingSixthPeopleSHospital,Shaoxing312000,China) [Abstract]0bjective:Tocomparethedifferencesbetweenthesetwowaysofacid—faststains.Methods:Testsimultaneously o

4、nthespecimensfromthesamepatientsbythewaysoffluorescencestainofAuramineOandZiehi—Neelsenstain.Results:Care. fulcontrastofthe240specimens,thereare84onesinthegroupofflouescencestain,whicharepositive,whosepositiverateis 35.O%.WhileinthegroupofZiehi—Neelsenstain,thereare70specimensprovedpositive,whosep

5、ositiverateisjust’29.2%. Throughtheinspectionof,resultingin=1.88,P>0.05,wecanseethereisondifferencebetweenthesetwoways.Interms ofwatchingtheirpositivecontrastof1+.therateoffluorescencestainis15.8%.buttherateofacid—faststainisonly9.6%. Meanwhile,throughtheinspectionofX,whichresultedin=5.56,P<

6、;0.05,obviously,therearesomedifferencesbetween them.WhatSparedwiththeirpositiveratesof2+.3+.4+.theyareallover0.05.whichiSalmostthe same.Conclusion:ComparedwithZiehi—Neelsenstain,fluorescencestainofauramineOhasaclearadvantageinseeking rates.Especiallytothepatientsofpulmonarytuberculosis.whosebacte

7、riumvolumeofsputumspecimensis1+andthepathologi— calchangesarelighterandthebacteriumcapacitiesaresmaller,atthesametime.Becauseoffluorescencestain,weneedspend lesstimeonlensexams.Whichisevenmoreefficient.Nodouhisfitsfortestingagreatspecimen. [Keywords]Fluorescencestain;Acid—faststain;Acid—fastbacil

8、lus 目前,临床上结核病细菌学的诊断主要采用抗酸染色法, 即萋一尼染色法,该法已成为抗酸杆菌检测的经典方法,但因 该法检测时间长,阳性检出率低,已无法满足临床诊断需要. 我们采用金胺”O”荧光染色法检测240例痰液标本,通过与萋 一 尼法对比试验,证明荧光染色法能提高抗酸杆菌的阳性检 出率. 1材料与方法 1.1荧光染色液的配制 染色液:金胺”0”1g溶于95%乙醇100ml中,加5%石 炭酸液900ml混匀即可.脱色剂:3%盐酸酒精.复染剂:高 锰酸钾0.5g,溶于100ml蒸馏水. 1.2抗酸染色液配制 [作者简介]戴学海(1962～),男,学士,副主任医师,

9、主要从事 老年内年及基础研究工作. 按照”全国结核病诊断细菌学检验规程”…进行. 1.3标本来源 结核病人痰液标本来自我院门诊或住院结核病人,这些 病人均经CT,PPD试验及结核抗体检测等临床诊断为肺结核 病人. 1.4操作方法 每份痰液标本按标准(2cm1cm)涂两张大小及厚度相 当的片子待干,火焰固定,将痰涂片随机分成荧光染色组和抗 酸染色两组进行染色和镜检. 1.5染色方法 将痰液涂片用荧光染色液染10min,水洗后用3%的盐酸 酒精脱色1～2min,至外观无黄色为止,水洗后加复染剂1～ 2min,水洗,晾干待检.抗酸染色法按全国结核病细菌学检验 规程进行.

10、 (下转第923页) 中国卫生检验杂志2008年5月第18卷第5期ChineseJournalofHealthLaboratoryTechnology,May2008:Vol18No5923 统计结果显示,微生物性病原是导致食物中毒的主要因素,其 中2003,2004年副溶血性弧菌导致的食源性疾病分别占微生 物性食源性疾病的40%和23%,已经超过沙门氏菌成为微生 物性食物中毒最大的致病菌,而深圳市2003～2006年细菌性 食物中毒的病因分析中,副溶血性弧菌也是排在首位.副溶 血性弧菌嗜盐畏酸,在无盐培养基上不能生长,在食醋中只 能存活1min,加热至56~C5～10m

11、in灭活.由该菌引起的 食物中毒多为进食海产品或盐腌渍品,其次为蛋品,肉类或 蔬菜.进食肉类或蔬菜而致病者,多因食物容器或砧板污染 所引起. 根据中毒患者的临床症状,流行病学调查和实验室检查 结果,可以确定本次食物中毒是一起由副溶血性弧菌引起的 食物中毒.造成这起中毒事故发生的原因:一方面是由于该 店环境卫生条件不良,操作间管理混乱,冰箱内存放的食品生 熟不分,冰箱内有血迹及积霜并出现滴水现象;厨房没有粗加 工间,砧板生熟不分,有一块砧板出现爆裂现象(砧板1),裂缝 内有食物残渣,未及时清除干净;而厨房当班厨师均留有长指 甲,带戒指,这些都可能存在交叉污染,为细菌的繁殖提

12、供了 条件;另一方面消费者的预防意识不够也是一个主要原因. 认为经过火锅的高温煮烫食物就灭菌了,为了保证肉的鲜嫩, 甚至煮很短时间就捞出食用,殊不知在高温下作用一定时间 细菌才会被杀死,时间过短将起不到应有的杀菌作用. 4建议 应加强对从业人员的卫生知识培训,提高其食品卫生管 理水平,降低操作不当及食品加工过程可能发生的危害因素, 保证食物安全卫生;同时也提醒我们卫生部门应加强《传染病 防治法》宣传,加大卫生知识执法力度,在食品卫生监督管理 中,预防细菌性食物中毒应重点抓住3个环节:①防止食品污 染;②控制细菌繁殖;③食品食用前应彻底加热,以消灭病原 菌的传播.消费者也

13、应多了解一些传染病的预防知识,增加 自我保护能力. [参考文献] [1]扈庆华,郑薇薇,石晓路,等.双重实时PCR快速同时检测霍乱弧 菌和副溶血弧菌[J].中华微生物学和免疫学杂志,2004,24(12): 1004一l007. (收稿日期:2008一O1—18) (上接第851页) 1.6镜检 荧光染色组采用OLYMPUSBX41显微镜观察,20X物镜 计数,40X物镜观察抗酸杆菌菌体形态,在暗视野背景下抗酸 杆菌发出黄绿色荧光.抗酸染色组涂片采用普通光学显微镜 进行检测.荧光染色和抗酸染色镜检时间和结果报告标准均 以全国结核病细菌学检验规程为准,以镜检1+以上者作

14、阳性 计算,对于1—3条/50个视野不作阳性计算,应重留标本复 杏. 2结果 240例肺结核病人痰液标本抗酸染色和荧光染色检测结 果见表1. 表1荧光染色和抗酸染色抗酸杆菌阳性检测结果 3讨论 近年来,诊断结核病仍主要依靠实验室检测抗酸杆菌,虽 然分子生物学方法如聚合酶链反应(PCR),脉冲电场凝胶电 泳(PEGE),IS6110一RFLP等方法检测结核杆菌DNA,具 有快速,敏感等优点,但临床诊断需要仍采用痰液涂片抗酸杆 菌检测,作为结核病最重要,最直接的依据.常用的萋一尼抗 酸染色操作繁琐,染色加热时易产生气溶胶;技术要求较高, 油镜观察视野范围小,镜检时间长,

15、检验人员易疲劳,同时对 于涂片中存在的少量细菌难以发现.从表中资料结果显示, 两组结果中抗酸杆菌1+的阳性率,荧光染色组为15.8%,抗 酸染色组为9.6%,=5.56,P<0.05,差别有显着性,而2+ 以上,均无显着性差异,这表明荧光染色和抗酸染色阳性率差 异主要体现在1+(即含菌量较少的痰液标本).对于那些病 变轻,排菌量少的肺结核的诊断具有重要价值,通过荧光染色 可明显提高阳性检测率,有利于临床诊断. 荧光染色镜检的注意事项:荧光染色后涂片应在24h内 镜检完成,遇需隔夜时,置4~C保存,次Et完成镜检,否则荧光 减退,会造成阳性结果的不确定或者漏检;荧光素染

16、色液应放 置于棕色瓶中暗处存放,且时间不超过2周;有个别菌体40X 暗色背景难以区别的抗酸杆菌,一定要转到IOOX油镜下加以 确认.荧光染色镜检抗酸杆菌在暗色背景下会发出黄绿色荧 光,非常醒目,容易发现,而且40X物镜视野大,镜检速度快, 而抗酸染色IOOX油镜视野较小,镜检较慢,因此,应用金胺 “0”荧光染色法检测抗酸杆菌是一种简便,准确方法,适合于 大批量标本检测,值得在临床上推广. [参考文献] [1]中国防痨协会.结核病细菌学检验规程[J].中国防痨杂志, 1996,18(1):28—29. [2]KunimotoDY,PeppierMS,TalbotJ,eta1

17、.Analysisofmycobactefium aviumcomplexisolatesfrombloodsamplesofAIDSpatientsbypulsed — fieldgelelectrophoresis[J].JClinMicrobiol,2003,41(1):498 — 499. [3]WillamHB,KerryHL,RandallH,eta1.Identificationofacontami. natingmycobacteriumtuberculosisstrainwithatranspositionofan IS6110insertionelementresultinginanalteredspoligotype[J].JClin Microbiol,2001,39(3):1092—1096. (收稿日期:2007—10一l8)