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1、植物组织中过氧化氢酶的活性测定 一紫外吸收法
【原理】
H2Q在240nm波长下有强烈吸收，过氧化氢酶能分解过氧化氢，使反应溶?吸光度（A240） 随反应时间而降低。根据测量吸光率的变化速度即可测出过氧化氢酶的活性。
【仪器与用具】
紫外分光光度计；冷冻离心机；研钵；容量瓶；刻度吸管；恒温水浴；分析天平
【试剂】
1. 0.05mol/L pH7.0 磷酸缓冲液
2. 0.2mol/L H 2Q溶液：30% H2Q 11.36ml溶于磷酸缓冲液中，定量至 250ml。
3. 0.05 mol/LTris-Hcl 缓冲?夜（pH7.0）
【材料】
正常生长或经逆境处理的新鲜植
2、物组织
【方法步骤】
1 .酶液提取：称取剪碎混匀的植物样品（如叶片等） 1.00g置与预冷的研钵中，加入适
量预冷的pH7.0磷酸缓冲液和少量石英砂冰浴研磨成匀浆后，转入 10ml容量瓶中，并用缓 冲液冲洗研钵数次，合并冲洗液，并定容到10ml。取提取液5ml于离心管中，在4C、15000g 下离心15min,上清液即为过氧化氢酶粗提液。 4c下保存备用。
2 .CAT活性测定
（1）取10ml具塞试管，加2ml酶提取液于沸水浴中加热煮死，冷却备用。
（2）取10ml具塞试管，3支为测定管（3个重复），1支为对照，按下表加入试剂：
表40-2 紫外吸收法测定HQ样品液配置表
3、管号
S1
S2
S3
S4
Tris-Hcl
1.0
1.0
1.0
1.0
粗酶液（ml）
0.1
0.1
0.1
0.1（煮死酶液）
蒸储水（ml）
1.7 (4)
1.7(4)
1.7(4)
1.7(4)
将上述4支试管于25c水浴中预热3min后，逐管加入0.2ml 0.2mol/L 的H2Q溶液，每 加完一管立即在紫外分光光度计上测定 A240（蒸储水调零），每隔30s读数一次，共测3min,
记录4支试管的测定值。（需用石英比色杯）
3 .结果计算：
以1min内从40降低0.1 （三支测定管的平均值）的酶量为 1个酶活单位（u）
4、,先求出3
支测定管各自1min内A240降低值，按下式计算 CAT活性。
A240 VT
过氧化氢酶活性（u/gFW/min尸0.1 V1 t FW
（Asi As2+AS3）
式中 A240 = Aso- 3 一
a so一加入煮死酶液的对照管吸光值;
S1, A S2,AS3一样品测定管吸光值；
Vt —酶提取液总体积（ ml ） ；
V 1—测定时用酶液体积（ ml ） ；
FW —样品鲜重（ g ） ；
0.1 —A240每下降0.1为1个酶活单位（U）；
t —加过氧化氢到最后一次读数时间（ min ） 。
【注意事项】
凡在240nm下有强吸收的物质对本实验有干扰。
【思考题】
1. 影响过氧化氢酶活性测定的因素有哪些 ?
2. 过氧化氢酶与哪些生化过程有关 ?
（注：专业文档是经验性极强的领域，无法思考和涵盖全面，素材和资料部分 来自网络，供参考。可复制、编制，期待你的好评与关注）
CAT酶活性测定
