《HTRF技术原理和应用介绍》由会员分享，可在线阅读，更多相关《HTRF技术原理和应用介绍（2页珍藏版）》请在装配图网上搜索。
1、精品文档，仅供学习与交流，如有侵权请联系网站删除
Cisbio-HTRF®技术原理和应用简介
HTRF®（均相时间分辨荧光，Homogeneous Time-Resolved Fluorescence ）是一种用来检测纯液相体系中待测物的技术。该技术基于荧光共振能量转移（FRET，Fluorescence Resonance Energy Transfer）和时间分辨荧光（TRF, Time-Resolved Fluorescence)）两大技术，开通的一款高通量药物筛选利器。
荧光共振能量转移（FRET）
利用两种荧光基团的能量转移，这两种荧光基团分别称为能量供体（Donor）和能量
2、受体（Acceptor）。Donor被外来光源激发（例如氙灯或激光），如果它与Acceptor比较接近，可以将能量共振转移到在Acceptor上，使其受到激发，发出特定波长的发射光。
将Donor和Acceptor分别与相互作用的两个生物分子结合，生物分子的结合可以将Donor和Acceptor拉到足够近的距离，产生能量转移，由于Acceptor的发射光来自能量转移，所以实验中不需要将未结合与已结合的分子分开，即不需要洗涤步骤。
时间分辨荧光（TRF）
TRF利用稀土元素中镧系元素的独特性质，它们与普通荧光的主要区别是荧光的持续时间不同。普通荧光的半衰期为纳秒级。镧系元素的半衰期为毫秒级
3、，有6个数量级的差别。所以，在检测室，TRF有一个时间延迟---50us，经过这个时间延迟，普通荧光的信号几乎为零，所以，TRF的背景非常低，反映样品实际情况。
HTRF®的能量受体（技术创新点）
HTRF®的能量供体是铕(Eu)和钛(Tb)的穴状化合物。在这个穴状化合物里，Eu和Tb被永久地嵌合在一个笼子里，结构非常稳定，这个结构由J.M.Lehn’s教授发明的，并由此在1987年获得了诺贝尔奖。
HTRF®的能量受体
HTRF®的能量受体也有二种，XL665和d2.它们的光学性质相同，分子量不同，前者分子量为10KD，实际上就是别藻蓝蛋白（APC）。我们将APC的亚基偶联在一起，使
4、其不能解离，提高了稳定性，后者分子量为1KD，在某些实验中有独特的优势。
HTRF®的操作步骤
HTRF®操作步骤非常简单，只需要将实验所需试剂加进去，然后孵育，检测即可。
HTRF®实验数据分析
HTRF®采用了比值法来处理数据，可以去除溶液通透率、细胞大小、细胞数量不同引起的误差。
HTRF®应用范围
激酶活性检测
生物标志物检测
受体第二信使检测
受体配体结合
胞内信号分子检测
胞外激酶活性检测
胞内激酶活性检测
基于抗体的夹心法和竞争法检测
抗体检测
生物/免疫过程分析
免疫检查点检测
抗体重链含量检测
抗体轻链含量测定
GST含
5、量测定 CD16结合检测
HIS含量测定 CD32结合检测
CHO宿主蛋白含量测定 CD64结合检测
PD1/PD-L1 CTLA4/B7-1
LAG3/MHC II CD47 / SIRP alpha
CTLA4/B7-2 Adenosin A2A
相互作用分析
蛋白修饰
实验室服务
蛋白-蛋白 / 蛋白-多肽
蛋白-DNA / 蛋白-RNA
蛋白甲基化 / 蛋白乙酰化
蛋白泛素化 / 蛋白水解
univlab@univ-
HTRF®技术优势：
1.操作简单，空板直接加样，加完即可检测，时间短（加样和孵育2h）！
2.适合珍贵样本：整个实验体系只需20ul
3.均相检测：无需包被，免洗ELISA，省时省力
4.体系稳定：7天内可随时检测，信号基本不变
5.数据客观真实：比值处理可有效去除背景荧光，假阳性率和价阴性率低
6.高端检测，只需简单的酶标仪就可以轻松搞定！
HTRF®检测的仪器
Cisbio与几乎所有的仪器供应商都建立了合作伙伴关系，下面是经过验证的仪器列表:
【精品文档】第 2 页
HTRF技术原理和应用介绍
