pPICZαA质粒图谱



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1、出品公司: 载体名称: 质粒类型: 表达水平: 启动子: 克隆方法: 载体大小: 5'测序引物及序列 3'测序引物及序列 载体标签: 载体抗性: 筛选标记: 备注: 产品目录号: 稳定性: 组成型: 病毒/非病毒: pPICZaa载体基本信息 Invitrogen pPICZalphaA,pPICZaA,pPICZalphaA,pPICZ“A,pPICZaA, pPICZa-A 毕赤酵母蛋白表达载体 高拷贝 AOX1 多克隆位点,限制性内切酶 3593bp 5AOX1:5-GACTGGTTCCAATTGACAAGC-3' 3AOX1:5
2、-GCAAATGGCATTCTGACATCC-3' C-Myc,C-His Zeocin博来霉素 HIS4 插入基因是必需包含起始密码子ATGo V195-20 稳定Stable 组成型Constitutive 非病毒 c-mycepitope6xHis 一eqx二ON一一。(tjs♦一OCX一3一8;dco<-cnESCQ 一汽二Ed-zo。山*薨<-eo a-factor MultipleCioningBelowisthemu
3、ltiplecluninmsitetorpllc'ZaA.RestrictionsitesarelabeledtoSiteofpPICZaAindicatethecleavagesite.Thebox叩niielectidesindicatethevanableregion.
ThemultipLccloningsiteliasbeenconfirmedbvsequencingandfunctionaltestin4(hecompleteseqiienceofpPtC-ZirAh 4、kalSupport(seepageForamapandadescriptionofthefeaturesofpPICZarefertopages21-22.
5end01AOX1mRHA5\4QX7primigsite
MlIAACCTTTTTTTTTATCATCATTATTAGCTTACTTTCATAATTGCGACTGGTTCCAATTGA
I
CAA^CTU'I'TGATTTTAACGACTrTTAACGACAACTTGAGAA.GATCAAAAAACAACTAATT
ATTCGAAACGATGA随TTTCCTTCAATTTTTACTGCTGTTTTATTCGCAGCAMet 5、ArgPheProSerHePheThrALaVaiLeuPheAlaAla
W3TCCTCCGCATTAGCTGCTCCAGTCAACACTACAA2AGAAGATGAAACGGCA
SerSerAlaLeuAlaAlaProVaiAsnThrTtirThrGluAspGluThrAla
u-factorsignalsequence
KHICAAATTCCGGCTGAAGCTGTCATCGGTTACTCAGATTTAGAAGGGGATTTC
GinlieProAlaGluAlaVaiILeGlyTyrSerAspLeuGluGlyAspPhe
H1K5GATGTTGCTGTTTT 6、GCCATTTTCCAACAGCACAAATAACGGGTTATTGTTT
AspVaiAl3Va1LeuProPheSerAsnSerThrAsnAsnGlyL仁uLeuPile
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115ftATAAATACTACTATTGCCAGCATTGCTGCTAAAGAAGAAGGGGTAICTCTClieAsnThrT^trlieAisSerHeAlaAlaL7sGluGinGlyVaiSerLeu
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S也signalcleavage
KpnIXboISacIINotIXteIomyew闭ope
ACCTCGAGCCGCGGCGGCCGCCAGCTTTCTAGAACAAAAACTCATCTCAGAAGAG
CLuGinLysLeulieSerGluGlupdyhstidinetag1I1
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1351TT 8、AGACATGACTGTTCCTCAGTTCAAGTTGGGCACTTACGAGAAGACCGGTCTTGCTAGA3"A0X1primingsits
Ml'lTTCTAATCAAGAGGATGTCAGAATGCCATTTGCCTGAGAGATGCAGGCTTCATTTTTGAT3'tJOlyaoefi/latioriEite
bFIACTTTTTTATTTGTAACCTATATAGTATAGGATTTTTTTTGTckTTTTGTTTCTTCTCGT
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X/ 9、w]siteupstreaji'LcitheKex2cleavagesitetccloneynur^eneflushwitihtheKex2
sitelset?p*i^e4formnredet3i]s
pPICZaA,B和C是3.6kb的毕赤酵母蛋白分泌表达载体。表达的重组蛋白是融合蛋白,含
有一个N-端多肽,编码酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)”-因子分泌信号。载体能够在毕赤酵母中利用甲醇诱导的高水平的表达目的蛋白,并且可以用在任何毕赤酵母中,包才X33,
GS115菌株,SMD1168H,KM71H。
pPICZaA,B和C系列载体包含以下元素:
?5 10、'端含有AOX1启动子的严格调控,利用甲醇诱导表达任何感兴趣的基因(Ellis等,1985;Koutz
等人,1989;tschopp等人,1987A)。
?0-因子分泌信号能够分泌性表达目的蛋白。
?Zeocin抗性基因在大肠杆菌(Escherichiacoli)和毕赤酵母都能用于筛选(Baron等人,1992;
Drocourt等人,1990)。
?C-端含Myc和His标签,可以用于检测和纯化重组蛋白。
?pPICZA,B,C三种读码框使得可以将基因克隆入载体而不发生任何移码突变。
pPICZaa载体序列
LOCUSpPICZAA3593bpDNAcircularSYN2 11、-SEP-2003
SOURCE
ORGANISM
COMMENTThisfileiscreatedbyVectorNTI
COMMENTVNTAUTHORNAME||
FEATURESLocation/Qualifiers
source1..3593
/invitrogen="25"
/vntifkey="98"
primercomplement(1423..1443)
/invitrogen="1880000"
/vntifkey="27"
/label=3'\AOX1\primer
primer855..875
/invitrogen="1890000"
12、
/vntifkey="27"
/label=5'\AOX1\primer
CDS1320..1337
/invitrogen="1010000"
/vntifkey="4"
/label=6xHis
primer1144..1164
/invitrogen="1900000"
/vntifkey="27"
/label=alpha-factor\primer
terminator1341..1682
/invitrogen="2550000"
/vntifkey="43"
/label=AOX1\transcription\terminator
CDS1275.. 13、1304
/invitrogen="1090000"
/vntifkey="4"
/label=c-myc\epitope
terminator2538..2855
/invitrogen="2560000"
/vntifkey="43"
/label=CYC1\transcription\terminator
promoter2095..2162
/invitrogen="2340000"
/vntifkey="30"
/label=EM7\promoter
misc_feature1208..1274
/invitrogen="1460000"
/vntifke 14、y="21"
/label=MCS
rep_origincomplement(2866..3539)
/invitrogen="2540000"
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/label=pUC\origin
CDS941..1207
/invitrogen="1280000"
/vntifkey="4"
/label=alpha-factor\signal\peptide
promoter1683..2094
/invitrogen="2300000"
/vntifkey="29"
/label=TEF1\promoter
CDS2163..2537
/inv 15、itrogen="1370000"
/vntifkey="4"
/label=Zeo(R)
promoter1..940
/invitrogen="2160000"
/vntifkey="29"
/label=AOX1\promoter
BASECOUNT892a886c801g1014t
ORIGIN
1agatctaacatccaaagacgaaaggttgaatgaaacctttttgccatccgacatccacag
61gtccattctcacacataagtgccaaacgcaacaggaggggatacactagcagcagaccgt
121tgcaaacg 16、caggacctccactcctcttctcctcaacacccacttttgccatcgaaaaacc
181agcccagttattgggcttgattggagctcgctcattccaattccttctattaggctacta
241acaccatgactttattagcctgtctatcctggcccccctggcgaggttcatgtttgttta
301tttccgaatgcaacaagctccgcattacacccgaacatcactccagatgagggctttctg
361agtgtggggtcaaatagtttcatgttccccaaatggcccaaaactgac 17、agtttaaacgct
421gtcttggaacctaatatgacaaaagcgtgatctcatccaagatgaactaagtttggttcg
481ttgaaatgctaacggccagttggtcaaaaagaaacttccaaaagtcggcataccgtttgt
541cttgtttggtattgattgacgaatgctcaaaaataatctcattaatgcttagcgcagtct
601ctctatcgcttctgaaccccggtgcacctgtgccgaaacgcaaatggggaaacacccgct
661ttttggatgattatgcattgtct 18、ccacattgtatgcttccaagattctggtgggaatact
721gctgatagcctaacgttcatgatcaaaatttaactgttctaacccctacttgacagcaat
781atataaacagaaggaagctgccctgtcttaaacctttttttttatcatcattattagctt
841actttcataattgcgactggttccaattgacaagcttttgattttaacgacttttaacga
901caacttgagaagatcaaaaaacaactaattattcgaaacgatgagatttccttcaatttt
9 19、61tactgctgttttattcgcagcatcctccgcattagctgctccagtcaacactacaacaga
1021agatgaaacggcacaaattccggctgaagctgtcatcggttactcagatttagaagggga
1081tttcgatgttgctgttttgccattttccaacagcacaaataacgggttattgtttataaa
1141tactactattgccagcattgctgctaaagaagaaggggtatctctcgagaaaagagaggc
1201tgaagctgaattcacgtggcccagccggccgtct 20、cggatcggtacctcgagccgcggcgg
1261ccgccagctttctagaacaaaaactcatctcagaagaggatctgaatagcgccgtcgacc
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1381ggcacttacgagaagaccggtcttgctagattctaatcaagaggatgtcagaatgccatt
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1741ggactccgcgcatcgccgtaccacttcaaaacacccaagc 22、acagcatactaaattttccc
1801tctttcttcctctagggtgtcgttaattacccgtactaaaggtttggaaaagaaaaaaga
1861gaccgcctcgtttctttttcttcgtcgaaaaaggcaataaaaatttttatcacgtttctttttcttgaaatttttttttttagtttttttctctttcagtgacctccattgatatttaag
ttaataaacggtcttcaatttctcaagtttcagtttcatttttcttgttctattacaactttttttacttcttgttcattagaaa 23、gaaagcatagcaatctaatctaaggggcggtgttgacaattaatcatcggcatagtatatcggcatagtataatacgacaaggtgaggaactaaaccatggccaagttgaccagtgccgttccggtgctcaccgcgcgcgacgtcgccggagcggtcgagttctggaccgaccggctcgggttctcccgggacttcgtggaggacgacttcgccggtgtggtccgggacgacgtgaccctgttcatcagcgcggtccaggaccaggtggtgccggacaacaccctggcctgggtgtgggt 24、gcgcggcctggacgagctgtacgccgagtggtcggaggtcgtgtccacgaacttccgggacgcctccgggccggccatgaccgagatcggcgagcagccgtgggggcgggagttcgccctgcgcgacccggccggcaactgcgtgcacttcgtggccgaggagcaggactgacacgtccgacggcggcccacgggtcccaggcctcggagatccgtcccccttttcctttgtcgatatcatgtaattagttatgtcacgcttacattcacgccctccccccacatccgctctaaccgaaa 25、aggaaggagttagacaacctgaagtctaggtccctatttatttttttatagttatgttagtattaagaacgttatttatatttcaaatttttctt
3541
ttttttctgtacagacgcgtgtacgcatgtaacattatactgaaaaccttgcttgagaaggttttgggacgctcgaaggctttaatttgcaagctggagaccaacatgtgagcaaaaggccagcaaaaggccaggaaccgtaaaaaggccgcgttgctggcgtttttccataggctccgcccccctgacgagcatca 26、caaaaatcgacgctcaagtcagaggtggcgaaacccgacaggactataaagataccaggcgtttccccctggaagctccctcgtgcgctctcctgttccgaccctgccgcttaccggatacctgtccgcctttctcccttcgggaagcgtggcgctttctcaatgctcacgctgtaggtatctcagttcggtgtaggtcgttcgctccaagctgggctgtgtgcacgaaccccccgttcagcccgaccgctgcgccttatccggtaactatcgtcttgagtccaacccggtaagacacga 27、cttatcgccactggcagcagccactggtaacaggattagcagagcgaggtatgtaggcggtgctacagagttcttgaagtggtggcctaactacggctacactagaaggacagtatttggtatctgcgctctgctgaagccagttaccttcggaaaaagagttggtagctcttgatccggcaaacaaaccaccgctggtagcggtggtttttttgtttgcaagcagcagattacgcgcagaaaaaaaggatctcaagaagatcctttgatcttttctacgggg
1921
1981
2041
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2221
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3001
3061
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3241
3301
3361
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3481
tctgacgctcagtggaacgaaaactcacgttaagggattttggtcatgagatc
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