枯草芽孢杆菌活菌数含量的测定操作规程

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1、 枯草芽孢杆菌活菌数的测定操作规程 文件编号 文件名称 编制日期 年 月 日 颁发部门 编 制 人 审 核 人 审核日期 年 月 日 印制份数 批 准 人 批准日期 年 月 日 生效日期 年 月 日 分发部门 质量管理部、生产部 目 的：建立枯草芽孢杆菌活菌数含量的测定标准操作规程 范 围：本方法适用于的枯草芽孢杆菌活芽孢的测定 责 任 人：

2、 内 容： 1. 仪器与工具：电子天平、生物显微镜、摇床、 18 × 180mm 试管、 500ml 三 角瓶、 10ml 刻度吸管、 1ml 刻度吸管 2 ．试剂与试液：牛肉膏、蛋白胨、琼脂、氯化钠、无菌蒸馏水、等。 3. 检测培养基配方：牛肉膏 3g 、蛋白胨 10g 、琼脂 16g 、氯化钠 5g 、蒸馏水 1000ml ，调至， 121 ℃灭菌 30min 。 4. 检测步骤： 菌液制备：采样量不少于 500g ，从所采的样品中精确称取试样，加入已灭菌的

3、 带玻璃珠（玻璃珠在  80 个左右）的  500ml  锥形瓶中，加入  90ml  已灭菌的无菌水， 在摇床上  200r/min  摇动  60min  ，即成母液的菌悬液。 用  1ml  无菌吸管吸取  1ml  上述母液的菌悬液，加入  9ml  无菌水混匀成  1：1× 10 2 稀释的菌悬液，这样依此稀释，直至得到  1：10 6； 1：10 7；1：10 8； 1：1

4、0 9 等 浓度（每个稀释度必须更换无菌吸管）。 向每个灭菌培养平皿中倒入约 12ml 培养基，混合均匀，待凝固后备用。 用 1ml 无菌吸管分别吸取不同稀释浓度菌悬液， 加至已凝固好的培养基中， 用涂布棒涂匀，在无菌操作台中静置 30min 后，倒置于 37 ℃的恒温培养箱内培养 18h — 24h 。每个样品取 3 个连续适宜稀释度，每个稀释度重复 3 次，同时加入无菌水的空 白对照，每个稀释度取 5 个到 10 个菌落的菌体，涂片染色，显微镜观察识别后计数 菌落。 5. 菌落计数： 以平板上出现 20 个——

5、200 个菌落数的稀释度平板为记数标准， 并确定为稀释倍数。 当只有一个稀释度， 其平均菌落数在 20 个—— 200 个之间时，则以该平均菌落数乘以其稀释倍数。 若有两个稀释度， 其平均菌落数在 20 个—— 200 个之间时， 应按两者菌落数之比值来决定。 6 、结果统计与计算 根据菌落数特征判定，分别数出平板中的枯草芽孢杆菌菌数及杂菌数（杂菌是指 除枯草芽孢杆菌外的其他菌种）。统计算出同一稀释度三个平皿上菌落平均数（ B ） 和杂菌数（ E ）。 有效活菌总数按式（ 1 ）计算； A=10 × B×C×5 (1) 式中： A——有效活菌总数， cfu/g B ——菌落活菌数； C——稀释倍数。 杂菌率按式（ 2 ）计算： E D= × 100 (2) E+A 式中： D ——杂菌率， % E ——杂菌数。