外周血PBMC的分离

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1、外周血PBMC的分离 原 理 n 外周血各种血细胞的密度不尽相同，利用淋巴细胞分层液（Ficoll）作密度梯度离心，使一定比重的细胞群按相应密度梯度分布，从而将各种血细胞加以分离。 1.093 外周血 红细胞 粒细胞 单个核细胞 血小板 淋巴细胞 单核细胞 1.030~1.035 1.075~1.090 Ficoll：1.077±0.001 (PBMC) 1.092 1500rpm, 20℃ , 30min PBMC 红细胞粒细胞 Ficoll 稀释外周血 Ficoll 稀释的血浆、血小板 实验步骤 n 1.采血，稀释

2、 （外周血：稀释液=1：2） n 2.在离心管中加入Ficoll，沿倾斜的管壁缓缓加入稀释的外周血（Ficoll：稀释血=1：2） n 3.18℃，1500r/min，离心30min n 4. 轻轻吸取PBMC层移入另一试管中 n 5.加足量稀释液充分洗涤，1800 r/min离心5min ，弃上清。 注意事项 n 每毫升外周血液大约可获1×106单个核细胞 n Ficoll应适量，外周血应充分稀释 n 温度直接影响到Ficoll的比重和分离效果 n 在Ficoll上加入稀释外周血时，应缓慢加，以免冲散界面 n 吸取单个核细胞层时，应避免吸出过多的上清液或分层液而导致血小板污染 （学习的目的是增长知识，提高能力，相信一分耕耘一分收获，努力就一定可以获得应有的回报） 3 / 3下载文档可编辑